小鼠脑组织的速冻保存：一种用于组织学分析的快速冷冻完整小鼠脑标本的技术

摘要

来源：Comba, A. 等。胶质瘤亚区域的激光捕获显微切割，用于肿瘤内异质性、肿瘤微流和侵袭的空间与分子表征。J. Vis. Exp. (2020)

本视频展示了小鼠脑组织的冷冻保存方法，以从肿瘤组织中分离出特定的解剖区域或特定细胞群体。该技术对于获得脑组织形态学的最佳光学分辨率，进而进行后续分析至关重要。

方案

1. 携带胶质瘤肿瘤的脑组织低温保存

1. 在冷冻保存脑组织之前，准备一个装有低温异戊烷（2-甲基丁烷）的烧杯，并将其放入盛有液氮的容器中。让溶剂充分冷却。
2. 将脑组织从30%蔗糖溶液中取出，并用滤纸吸干表面液体。
3. 用永久性记号笔标记冷冻模具。小心地将约5 mL OCT包埋剂（最佳切割温度化合物）加至冷冻模具中央，避免产生气泡。
4. 将脑组织以所需方向置于含有OCT的冷冻模具中。继续加入OCT直至脑组织完全浸没。使用洁净的镊子迅速将含有OCT和脑组织的冷冻模具放入低温异戊烷/2-甲基丁烷中。
5. 待OCT完全凝固（约30–40秒）后，取出带有脑组织的冷冻模具并置于干冰上。切勿将含脑组织的模具在2-甲基丁烷中停留超过2分钟，以免导致固化的OCT出现裂纹。用铝箔包裹带有脑组织的冷冻模具，并于-80 °C保存。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
剥离式一次性包埋模具	Electron Microscopy Sciences	70182
研究用冷冻切片机	Leica	CM3050s
组织加O.C.T.包埋剂	Fisher Scientific	23-730-571