冷冻小鼠脑组织切片：从小鼠冷冻脑组织获取薄切片的操作流程

摘要

来源：Comba, A. 等. 胶质瘤亚区域的激光捕获显微切割，用于肿瘤内异质性、肿瘤微流和侵袭的空间与分子表征。J. Vis. Exp. (2020)

在本视频中，我们演示了使用冷冻切片机对冷冻的小鼠脑肿瘤组织进行切片。所获得的冷冻脑组织切片将保存在低温条件下，直至进行后续分析。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 冷冻脑肿瘤组织切片

1. 用样本信息标记2 µm聚萘二甲酸乙二醇酯（PEN）载玻片。切片后，组织切片将直接放置在这些载玻片上。
2. 将冷冻切片机腔室温度设置在-20至-24 °C之间。切片前，将样本块放入冷冻切片机腔室中，使其在腔室内平衡温度30–60分钟。
3. 用100%乙醇清洁冷冻切片机腔室和刀架，并用RNase清除溶液喷洒将要使用的刷子。在冷冻切片机腔室内操作，取出模具，用OCT将含脑组织的样本块固定在冷冻切片机的样品盘上。将样本块放入盘架中，并与刀片对齐。
4. 将一次性刀片安装到切片刀架中。
5. 以10 µm厚度对脑组织进行切片。确保组织切片无条纹或划痕。使用画笔小心地将组织在切割表面展平并展开卷曲部分。
6. 小心地将含有脑切片的组织转移至无RNase的PEN玻璃载玻片上。用手指将带正电荷的玻璃载玻片朝向组织方向翻转，并平稳地将载玻片压向组织切片。
   注意：手部温度有助于组织附着于载玻片上。
7. 将脑切片转移至载玻片后，将载玻片置于冷冻切片机腔室内的盒子中，随后储存在-80 °C条件下。切勿将载玻片置于室温环境中。
   注意：组织折叠和撕裂....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
PEN 膜玻璃载片（2 µm）	Lieca	1150518
研究用冷冻切片机	Leica	CM3050s
RNA酶喷雾清除剂（RNaseZap RNase 去污染溶液）	Fisher Scientific	AM9780
一次性可剥离包埋模具	Electron Microscopy Sciences	70182
定位溶液（Pinpoint Solution）	Zymo Research	D3001-1
组织包埋剂 O.C.T. Compound	Fisher Scientific	23-730-571