生物膜干涉技术检测配体和分析物之间的相互作用

Abstract

来源:Desai， M. 等人。生物膜干涉测量法 （BLI） 在转录中研究蛋白质-蛋白质相互作用的应用。J. Vis. Exp.（2019 年）

在本视频中，我们演示了生物膜干涉测量 （BLI） 技术，用于实时检测配体和目标分析物之间的分子间相互作用。BLI 测量生物传感器表面上的一层固定化配体反射的白光与溶液中的分析物相互作用时干涉图案的变化。

Protocol

1. 生物传感器水合和检测设置

1. 打开 BLItz 机器。
2. 确保本机通过本机背面的 USB 数据输出端口连接到计算机。
3. 在计算机上，打开相关软件（例如 BLItz Pro），然后单击屏幕左侧的 Advanced Kinetics。
4. 在软件上，在每个相应的标题下输入有关实验的所有适当信息（包括实验名称、描述、样品 ID 和蛋白质浓度）。
5. 单击生物传感器类型，然后从下拉菜单中选择 Ni-NTA。
   1. 在 Run Settings （运行设置） 标题下，验证 Shaker 是否设置为 Enable （启用）。
   2. 在"步骤类型列表"标题下，验证是否列出了 5 个项目:初始基线、加载、基线、关联和分离><。 注意:每个步骤的持续时间可以根据需要从默认值更改。为获得最佳结果，请对 Initial Baseline 和 Baseline 使用至少 30 秒;和 120 秒的关联和解离。加载步骤的持续时间（范围从 120 到 240 秒）将取决于配体的浓度和配体上 His 表位标签对 Ni-NTA 生物传感器的亲和力。
6. 从....

Materials