生物分子相互作用检测技术

在本视频中，我们介绍用于检测和定量蛋白质-蛋白质相互作用的场效应生物传感（FEB）技术。固定在石墨烯生物传感器上的目标蛋白质与溶液中的分析物蛋白质发生相互作用，导致FEB系统中电流发生变化。这种电学信号的变化反映了蛋白质之间的结合亲和力。...

在本视频中，我们展示了在流动池中利用质量光度法研究抗原-抗体相互作用的方法。聚焦光根据分子质量的不同而产生差异化的散射。探测器收集散射光，并生成具有不同强度的光斑干涉图样，这些光斑强度与分子质量相对应。...

该视频介绍了利用荧光寿命成像-荧光共振能量转移（FLIM-FRET）技术，在表达带有荧光蛋白标记的胞质蛋白（供体eGFP和受体mCherry）的活细菌中检测蛋白质-蛋白质相互作用的方法。该联合技术还可实现对相互作用蛋白的定量分析。...

在本视频中，我们演示了通过HEK细胞聚集实验来检测突触细胞黏附分子之间跨细胞相互作用的技术。在该实验中，将表达目标突触前细胞黏附分子和一种荧光蛋白的HEK细胞，与表达突触后细胞黏附分子及另一种荧光蛋白的HEK细胞等量混合。细胞黏附分子之间的相互作用促使细胞发生聚集，可通过荧光显微镜进行观测和测量。...

本视频介绍了用于研究线虫细胞中原位蛋白质-蛋白质相互作用的邻近连接分析技术。当目标蛋白质彼此靠近时，在连接有二抗的PLA探针的帮助下，可形成环状DNA模板。随后使用扩增溶液对探针进行扩增，产生一条长的单链DNA，再通过检测探针的杂交，实现细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的定位。...

本视频展示了在PVDF膜上进行共免疫沉淀蛋白复合物以分析蛋白质-蛋白质相互作用。复合物中的还原蛋白经胰蛋白酶处理，将各个蛋白切割成较小的肽段，随后从PVDF膜中提取剩余的肽段。来自复合物中两种蛋白的捕获肽段经干燥后，重悬于低浓度甲酸溶液中，用于后续分析。...

在本视频中，我们演示了生物层干涉技术（BLI），用于实时检测配体与目标分析物之间的分子间相互作用。BLI通过测量白光从生物传感器表面固定化配体层反射后产生的干涉图样变化，来监测溶液中分析物与配体相互作用时所引起的变化。...

本视频展示了利用荧光涨落光谱技术检测细胞间接触处细胞表面蛋白相互作用的方法。通过表达带有荧光蛋白标记的跨膜黏附受体，并混合携带两种光谱可区分荧光标记的不同细胞群体，可评估相邻细胞间不同颜色荧光标记受体之间的跨膜相互作用。 通过...

在本视频中，我们演示了一种利用包被了抗GFP抗体的磁珠，对GFP标记的野生型和突变型PD-1蛋白进行共免疫沉淀的技术。将磁珠结合的PD-1-GFP蛋白与可与PD-1相互作用的SHP2蛋白共同孵育，从而能够鉴定PD-1中在SHP2相互作用中起关键作用的特定结构基序。...

本视频介绍了一种基于ELISA的技术，通过检测第二种蛋白质与固定化的第一种蛋白质的结合，来测定两种蛋白质之间的相互作用。利用酶标记的特异性抗体（如辣根过氧化物酶）检测已结合的第二种蛋白质。...

本视频展示了一种阻抗生物传感器检测方法，用于研究抗体与固定在换能器芯片上的靶抗原之间的相互作用。该生物传感器经工程化设计，含有一种双功能嵌合蛋白——即一个具有功能性催化位点的β-内酰胺酶，与一个可结合固定化靶抗原的纳米抗体相融合。当发生结合后，β-内酰胺酶对抗生素底物的催化水解反应产生电信号，从而确认抗原-抗体的相互作用。...

本视频展示了一种利用生物素标记的细胞穿透肽检测细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的技术。细胞穿透肽可促进其偶联的肽段进入细胞，并特异性结合与其相互作用的蛋白质。在与亲和素结合后，生物素能够从细胞裂解液中纯化出相互作用蛋白质的复合物。...

本视频演示了利用酵母双杂交实验检测特定蛋白质自身相互作用的方法。在该实验中，将目标蛋白分别与编码β-半乳糖苷酶的转录因子的两个结构域进行融合标记。当两个蛋白发生相互作用时，会启动转录和翻译过程，形成具有活性的酶，随后通过生化实验检测该酶的存在。...

该视频演示了串联亲和纯化 —...

本视频介绍了利用传感器芯片研究两种分子相互作用的表面等离子体共振（SPR）技术。通过检测两种分子结合与解离过程中共振角的变化以及反射光强度的变化，可以获得这两种分子间相互作用的信息。...

本视频介绍了利用核磁共振波谱技术研究15N标记的野生型和突变型envoplakin蛋白与未标记的vimentin蛋白之间相互作用的方法。野生型envoplakin与vimentin成功相互作用会导致核磁共振谱图中谱线显著展宽和信号峰消失；而突变型envoplakin与vimentin之间缺乏相互作用，则在核磁共振谱图中呈现分辨良好的信号峰。...

在本视频中，我们演示了噬菌体展示技术，用于分离表达对目标蛋白具有高亲和力蛋白的预先改造噬菌体。...

本视频展示了利用荧光涨落光谱法（FFS）研究蛋白质同源寡聚化的技术。在使用FFS研究蛋白质寡聚化时，样品中带有荧光标记的蛋白质会通过某种试剂诱导形成二聚体。利用共聚焦显微镜，当蛋白质分子进出微小的观测体积时，通过分析荧光分子亮度涨落的变化，可确定蛋白质的寡聚状态。...

本视频介绍了BiFC-PALM技术——即光激活定位显微镜与双分子荧光互补技术的结合，用于检测蛋白质-蛋白质相互作用。双分子荧光互补（BiFC）技术涉及将两种目标相互作用蛋白分别与两个荧光蛋白片段融合。当这两个蛋白发生相互作用时，荧光蛋白片段被拉近至彼此邻近的位置，从而能够结合并重建出具有功能的完整荧光蛋白。通过PALM技术，可在单分子水平上对细胞内单个荧光分子的荧光信号进行精确定位。...

在本视频中，我们介绍了利用荧光各向异性技术研究荧光标记的Shwachman-Diamond综合征（SBDS）蛋白与延伸因子样1...

在本视频中，我们演示了细胞内核磁共振波谱技术，用于研究未标记的过表达蛋白质与小分子之间的蛋白质-配体相互作用。通过在目标谱峰区域出现一组新的峰并逐渐取代原有峰的现象，可直观地确认配体与蛋白质的成功结合。...

本视频展示了一种利用基于石英晶体微天平（QCM）生物传感器的T7噬菌体展示肽库生物筛选方法来研究蛋白质-药物相互作用的技术。通过在QCM生物传感器上对展示特异性肽段的噬菌体进行生物筛选，可特异性分离出高亲和力肽段，随后进行氨基酸测序，从而帮助确定靶标蛋白上的特异性相互作用位点。...

本视频介绍了SEC-MALS技术，该技术结合了尺寸排阻色谱法（SEC）和多角度光散射（MALS）的优势。在SEC-MALS中，SEC根据蛋白质或蛋白质复合物的大小对其进行分离，而MALS检测器则通过测量分子在不同角度下散射光的强度，确定其平均分子量。...

在本视频中，我们展示了双分子互补亲和纯化（BiCAP）技术，该方法利用构象特异性的单域抗体来检测并分离特定的蛋白质二聚体。...

在本视频中，我们介绍了一种基于流式细胞术的竞争性结合实验方法，用于检测CXC趋化因子受体4（CXCR4）与其荧光标记的天然配体CXC趋化因子配体12（CXCL12）之间的相互作用，该检测在存在靶向CXCR4的小分子化合物的条件下进行。当将表达CXCR4的细胞与较低浓度的小分子共同孵育时，CXCR4与CXCL12仍可发生一定程度的结合；而随着小分子浓度逐步增加，这种结合逐渐减少。...

本视频展示了基于报告基因检测的受体-配体相互作用分析方法。成功的受体-配体相互作用会激活下游信号通路，导致细胞产生并释放细胞因子作为溶液中的分泌型报告分子，随后通过ELISA进行检测确认。...

在本视频中，使用生物膜力探针（BFPs）来测量受体与配体之间的相互作用力。该技术通过监测破坏探针微球上偶联的pMHC与靶细胞上的TCR之间结合所需的压强，从而检测分子间的相互作用。...

本视频展示了一种用于研究GTP酶结合蛋白伙伴的竞争性结合实验。通过将结合了核苷酸的GTP酶蛋白固定在磁珠上，可研究两种相互作用的蛋白伙伴对GTP酶同一结合位点的竞争性结合，从而评估这些蛋白伙伴的结合亲和力。...

在本视频中，我们演示了使用印有流感病毒株抗原亚型的微阵列芯片，对多个人类血清样本中的抗体亚型进行检测的过程。...

在本视频中，我们演示了使用红外荧光标记的DNA探针，通过电泳迁移率变动实验检测蛋白质-DNA相互作用的方法。当蛋白质与DNA探针结合时，会形成一个较大的复合物，在凝胶电泳中迁移较慢，并表现为发生迁移的条带。...

在本视频中，我们演示了染色质免疫沉淀技术，用于鉴定少突胶质前体细胞基因组DNA特定区域上的蛋白质结合位点 通过...

本视频介绍了高灵敏度荧光各向异性技术，可用于监测转录因子与DNA之间的相互作用。该检测方法通过测量荧光标记DNA分子因分子旋转或荧光基团各向异性所产生的偏振程度，来监测荧光标记DNA分子与其特异性转录因子之间的相互作用。...

该视频演示了细菌体内检测，以研究 RNA 结合蛋白 （RBP） 与 RNA 的相互作用。细菌细胞用两个质粒构建体转化 — 一个结合位点质粒编码含有 RBP 结合位点下游荧光报告基因的 mRNA，而 RBP 质粒在诱导剂的控制下表达 RBP 蛋白。在诱导剂介导的 RBP 产生增加后，RBP 与 mRNA...

在本视频中，我们展示了改良的酵母单杂交实验方法，该方法可用于检测多种蛋白质与靶DNA的相互作用。转化后的酵母细胞在报告基因上游含有靶DNA序列，同时表达转录因子蛋白。当这些蛋白形成复合物并结合到靶DNA上时，报告基因将被表达，并可通过酶学方法进行检测。...

在本视频中，我们演示了确定靶蛋白解旋酶活性以解开生物素标记的 dsRNA...

在本视频中，我们介绍了免疫荧光方法，用于观察经辐射处理的细胞核中DNA双链断裂位点处DNA修复蛋白γH2AX和53BP1的定位情况。...

该视频演示了一种体外 RNA 沉降测定法，用于鉴定 RNA 结合蛋白 （RBP），它与 mRNA 中富含腺苷酸-尿苷酸的元件 （ARE） 序列相互作用。来自细胞裂解物的靶标 RBP 与 RNA 探针混合，形成 RNA-蛋白质复合物。利用 RNA...

在本视频中，我们介绍了通过指数富集配体系统进化（SELEX）方法，筛选针对目标蛋白的特异性RNA结合序列。该方法将目标蛋白与大量随机序列的RNA文库共同孵育，分离出与蛋白结合的RNA序列，再通过PCR扩增和测序，以确定其与蛋白结合的位点。...

本视频介绍了一种利用单分子成像技术，在特定基因位点上可视化融合蛋白凝聚体在DNA分子上组装的方法。这些凝聚体的形成源于LCD-LCD和LCD-DBD相互作用，从而能够招募RNA聚合酶II并增强基因转录。...

本视频演示了差示扫描量热法——一种用于研究生物分子与配体之间相互作用的技术。通过对待测样品施加反复的加热和冷却循环，并获取热力学分析所需的扫描数据，来研究DNA适配体与热不稳定配体之间的结合。...

本视频演示了利用微尺度热泳技术研究蛋白质-脂质相互作用的方法。该检测通过定量荧光标记蛋白质在温度梯度下的热泳运动来检测分子间的相互作用。将荧光标记分子与不同浓度的非荧光脂质分子混合后，将溶液中的分子混合物装入毛细管中。对毛细管中的样品施加温度梯度，检测并记录荧光分子在温度梯度中的迁移行为。...

在本视频中，我们利用定量流式细胞术演示蛋白质与人工磷脂囊泡之间的相互作用。荧光标记的蛋白质与荧光标记的磷脂囊泡结合后，会使平均荧光强度增加，该变化可通过流式细胞仪检测。...

本视频演示了一种耗散性微重力测定技术，用于研究蛋白质与脂双层的结合。将小单层囊泡加入到石英传感器表面，使其包被微天平的传感器表面。利用目标磷脂结合蛋白与脂双层之间依赖钙离子的结合特性，监测传感器振荡频率的变化以及振荡能量的耗散，以确定蛋白质与脂双层结合的性质。...

在本视频中，我们利用微流控平台上的pH值调节检测法，演示了蛋白质与磷脂酰肌醇脂质之间的相互作用。该方法采用对pH敏感的荧光染料标记支撑脂双层中的磷脂酰乙醇胺脂质。当蛋白质与磷脂结合后引起pH值变化，从而导致荧光淬灭。...