一种建立右旋糖酐硫酸钠诱导小鼠结肠炎模型的技术

摘要

来源：Du, Y., 等. 味觉信号蛋白缺失对炎症性肠病小鼠模型肠道炎症的影响. 视觉化实验杂志 (2018)

本视频展示了一种通过化学诱导建立小鼠结肠炎模型的技术——结肠炎是一种炎症性肠病。让小鼠饮用右旋糖酐硫酸钠（DSS）溶液足够时间。摄入后，DSS会破坏结肠中的黏液层和上皮屏障，使肠道微生物进入下方组织，被局部免疫细胞识别，从而引发过度的免疫反应，导致炎症发生。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠和DSS的准备

1. 将基因敲除小鼠（α-gustducin^-/-）与年龄、性别和体重相匹配的野生型对照小鼠（α-gustducin^+/+）C57BL/6 小鼠分别饲养于清洁的笼具中。
   注意：基因敲除小鼠已与 C57BL/6 小鼠回交超过 20 代，具有接近 100% 的 C57BL/6 遗传背景。
2. 将 30 g 右旋糖酐硫酸钠（DSS）粉末溶于 1 L 高压灭菌水中，搅拌至溶液澄清，确保最终工作浓度为 3%（w/v）。
   注意：DSS 溶液可在室温下保存最多 1 周，或置于 4 °C 保存至使用。

2. 小鼠DSS结肠炎的诱导与评估

1. 称重并记录每只小鼠的初始体重。将小鼠分别放入标准塑料笼中，并标记笼子。
2. 将普通饮用水替换为3% DSS溶液，持续7天，两组小鼠均可自由摄取（ad libitum）。
3. 在DSS处理期间，每天测量小鼠体重，记录DSS溶液消耗量，并收集和检查每只小鼠的粪便。观察腹泻和直肠出血的严重程度，并将其转换为DSS诱导的疾病指数。
4. 实验过程中，通过计算相对于初始体重的体重减轻百分比和疾病指数，评估结肠炎症状。
   注意：疾病指数结合腹泻和直肠出血的观察结果进行评分，定义如下：0分（粪便正常，无血）、1分（粪便偏软，无血）、2分（粪便偏软，少量血）、3分（粪便很软，中度出血）、4分（水样便，明显出血）。每只小鼠的疾病指数每日进行分析。
5. 在为期7天的DSS处理结束后，通过颈椎脱臼法处死小鼠，并继续进行后续实验。

3. 组织样本的制备

1. 将小鼠置于仰卧位，用70%乙醇清洁腹部皮肤。用小型剪刀在腹部做一条3 cm长的正中切口，暴露腹腔。
2. 使用镊子小心分离脾脏与其他组织，取出脾脏并测量其大小。
3. 用镊子识别并提起结肠，分离周围肠系膜。将整个结肠拉出，直至盲肠和直肠可见。
4. 在结肠-盲肠交界处和盆腔深部横断结肠，分别游离近端和远端结肠。然后测量并记录分离后结肠的长度。解剖过程中注意避免损伤结肠组织。
5. 用配备灌胃针头的10 mL注射器，以10 mL冰冷的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗结肠，去除粪便和血液，直至流出液完全澄清。
6. 为进行组织学鉴定，将组织样本均分为三部分：近端、中段和远端。随后在4 °C条件下，用4%多聚甲醛（PFA）固定过夜。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
试剂
Dextran Sulfate Sodium Salt (DSS)	MP Biomedicals	2160110
磷酸盐缓冲液 (PBS)	Sangon Biotech	B548117
BD 10 ml 注射器	BD Biosciences	309604
仪器与设备
天平
剪刀
镊子