一种用于小鼠可控性Helicobacter感染的经口胃内灌胃技术

摘要

来源：D'Costa, K. 等 小鼠模型 幽门螺杆菌 感染与胃部病理学 视频实验杂志 (2018)

本视频展示了建立 幽门螺杆菌 通过灌胃法在小鼠模型中建立感染。将细菌悬液给予 通过 通过口腔插入胃内的导管。接种的细菌在胃内定植并建立感染，可用于研究宿主与病原体之间的相互作用。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 细菌接种物的培养与制备

1. 解冻甘油菌种保藏管 幽门螺杆菌（H. pylori））或 H. felis 从-80 °C取出后，在含以下成分的马血琼脂（HBA）平板上进行传代培养：血液琼脂基础培养基No.2（见材料表）；改良的“Skirrow抗生素选择性补充剂”（含万古霉素10 μg/mL、多粘菌素B 25 ng/mL、甲氧苄啶5 µg/mL、两性霉素B 2.5 μg/mL）；以及5–10%（v/v）马血。细菌在37 °C、微需氧条件下，在含有适当气体包的2.5或3.5 L厌氧罐（见材料表）中生长良好。
   注意： H. pylori 在这些条件下培养的菌株必须在培养1–1.5天后进行转接培养，而 H. felis通常需要至少2天的孵育时间。合适的培养和保存培养基此前已有详细描述。
2. 从小至中期对数生长阶段的培养物中制备用于小鼠感染的细菌接种物。通过向每块琼脂平板加入1–2 mL脑心浸出液（BHI）肉汤，轻柔地冲洗平板以收获细菌。使用巴斯德吸管吸取平板上的菌悬液。
   1. 或者，从 幽门螺杆菌 在BHI肉汤中培养16–18小时的细菌。在此情况下，以2,200 x....

结果

图1：展示口服灌胃技术的示意图。 一次性1 mL注射器和软质导管用于输送≥10⁵ 小鼠细菌接种物的菌落形成单位（CFU） 通过 经胃内途径。使用甲氧氟烷麻醉小鼠，并牢固握住其颈部，以便导管进入胃部 通过 食管

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
细菌学试剂
Oxoid Blood Agar Base No.2	Thermo Fischer Scientific	CM0271B	使用前溶于去离子水中，再进行灭菌
Premium Defibrinated Horse blood	Australian Ethical Biologicals	PDHB100
Bacto Brain Heart Infusion Broth	BD Bioscience	237500	使用前溶于去离子水中，再进行灭菌
CampyGen gas packs	Thermo Fischer Scientific	CN0035A/CN0025A
其他试剂
Methoxyflurane (Pentrhox)	Medical Developments International	不适用
仪器与塑料耗材
Oxoid Anaerobic Jars	Thermo Fischer Scientific	HP0011/HP0031
COPAN Pasteur Pipettes	Interpath Services	200CS01
Eppendorf 5810R 离心机			在 4°C 条件下以 2,200 rpm 离心 10 分钟，收集菌体沉淀
23g precision glide 针头	BD Bioscience	301805
Parafilm M	Bemis, VWR	PM996
Portex 细孔聚乙烯导管	Smiths Medical	800/100/200
塑料喂养导管	Instech Laboratories	FTP20-30
1 ml 结核菌素鲁尔滑动一次性注射器	BD Bioscience	302100
适用于 1.2 - 2 mL 管的 Eppendorf 微型研磨棒	Sigma Aldrich	Z317314	可高压灭菌的聚丙烯研磨棒，用于胃组织匀浆
无菌塑料接种环	LabServ	LBSLP7202