对流增强递送抗体至小鼠脑部

摘要

来源：Beffinger, M.，等。通过对流增强递送将抗体递送至小鼠脑内。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频演示了一种用于将抗体递送至小鼠脑部的对流增强递送（CED）技术。暴露麻醉小鼠的颅骨，并在目标区域钻出一个骨孔以用于抗体递送。将含有抗体的阶梯式导管插入目标部位，并通过输注泵产生压力梯度，以可控速率递送抗体。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 阶梯导管的制备

1. 制作用于导管台阶步骤的熔融石英管
   1. 将内径为0.1 mm、壁厚为0.0325 mm的熔融石英毛细管切割成30 mm长。
   2. 检查管材是否有裂纹，并使用微熔器对管端进行热抛光，以确保管口表面光滑。
2. 将内管固定于金属针头中
   1. 将27 G针头安装在10 μL注射器上，并将注射器置于立体定位机器人中。
   2. 使用机器人将注射器移至硬质表面，并用针尖轻触该表面。应记录或在软件中保存此位置，因其将作为设定导管台阶长度的参考平面。
   3. 抬升针头，以便将熔融石英毛细管插入针头内部。
   4. 将熔融石英毛细管插入针头，使毛细管有20 mm部分从针头端伸出。
   5. 使用移液器，从金属针头处开始，向上延伸至毛细管下端以上10 mm处，均匀涂抹2 μL高黏度氰基丙烯酸酯胶水，如图1所示。
   6. 使用立体定位机器人，将针头下移，直至金属针头尖端位于参考平面上方1 mm处。这样可使熔融石英毛细管在金属针头中固定，形成距针尖1 mm的台阶。清除金属针头末端....

结果

图1：粘合剂应用区域的示意图。 将熔融石英管的上端10 mm插入金属针头中。从金属针头尖端开始，沿10 mm长的管段涂抹胶水。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
10 μL 注射器	Hamilton	7635-01
27 G 钝头针	Hamilton	7762-01
琼脂糖	Promega	V3121
阿替美唑	Janssen
骨蜡	Braun	1029754
丁丙诺啡	Indivior Schweiz AG
卡洛芬	Pfizer AG
牙科钻头，钢制，ISO 009 规格	Hager & Meisinger	1RF009
100% 乙醇	Reuss-Chemie AG	179-VL03K-/1
芬太尼	Helvepharm AG
异硫氰酸荧光素标记葡聚糖，2000 kDa	Sigma Aldrich	FD2000S
氟马西尼	Labatec Pharma AG
甲醛	Sigma Aldrich	F8775-500ML
高黏度氰基丙烯酸酯胶水	Migros
碘溶液	Mundipharma
美托咪啶	Orion Pharma AG
微电极拉制仪	Narishige	MF-900
咪达唑仑	Roche Pharma AG
眼科软膏	Bausch + Lomb	Vitamin A Blache
PBS	ThermoFischer Scientific	10010023
与 Alexa Fluor 647 偶联的多克隆山羊抗大鼠 IgG (H+L) 抗体	Jackson Immuno
手术刀	Braun	BB518
石英毛细管，内径 0.1 mm，壁厚 0.0325 mm	Postnova	Z-FSS-100165
小鼠立体定位仪	Stoelting	51615
立体定位机器人	Neurostar	Drill and Injection Robot
蔗糖	Sigma Aldrich	S0389-500G
外用组织粘合剂	Zoetis	GLUture
台盼蓝	ThermoFischer Scientific	15250061
水	Bichsel	1000004