基于肽阵列的器官移植受者抗供体HLA同种抗体检测

摘要

来源：Liu, P.，等。用于检测器官移植中HLA同种抗体的个性化肽阵列。J. Vis. Exp. (2017)。

本视频展示了一种用于检测器官移植受者体内抗供体 HLA 同种异体抗体的实验方法。合成肽阵列以代表可能引起抗体介导的器官排斥反应的表位。将该阵列与受者血清孵育，血清中的同种异体抗体将结合其靶向表位。通过化学发光法检测抗体结合情况，从而鉴定引发同种异体抗体反应的供体特异性 HLA 表位。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 定制化芯片布局的设计与制备

1. 生成一个包含肽序列及其相应等位基因分型的电子表格。该阵列包含20行和30列，最多可容纳20×30=600个肽位点。根据步骤1.5中记录的某一供体的肽总数，并结合我们此前尝试过的两个实例的经验，600个位点的阵列可容纳约2个独立移植病例所产生的全部序列。
   1. 合理规划多肽组合在阵列600个点位格式中的排布，以实现最高效的利用。
   2. 如果一个完整阵列可容纳多名受试者，应在第一位供体序列后插入空行，使总行数为30的整数倍（阵列中每行包含30个点位）。
   3. 在第一组序列的最后一个空白行之后，立即粘贴第二个移植病例的整列序列内容。
   4. 重复这些步骤，直至阵列填满，且无法在不超出600个点位的情况下添加更多样本。若底部剩余整行空白行需要填充，请将该空白行“移动”至两组供体样本之间。在样本点之间保留这一较宽间距，有助于在合成完成后更方便地切割膜——见下文步骤2.2。
2. 在阵列布局的背景下编写肽序列程序。SPOT合成仪的程序接受以文本格式输入的序列（每行一个肽序列），该文本格式可直接通过将步骤1.1.4所得电子表格另存为纯文本文件（不含等位基因名称、氨基酸位置的额外列）获得。 等等。).
3. 通过....

结果

图1. 使用Ponceau S染色的微阵列区域图像

颜色强度的差异是由于不同肽段的氨基酸组成不同所致，而所有点样区域的肽段浓度均相同。（该图像为示意图，非本研究实际结果图像。）

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
肽阵列	INTAVIS Bioanalytical Instruments
乙醇	Sigma-Aldrich	E7023
丽春红S溶液	Sigma-Aldrich	P7170
脱脂奶粉	Bio Rad Laboratories	1706404
TBST	Santa Cruz Biotechnology	10711454001
山羊抗人IgG-HRP	ThermoFisher Scientific	A18811
Clarity Western ECL底物	Bio Rad Laboratories	1705061
Restore Western Blot stripping缓冲液	Thermo Scientifics	21059
ChemiDoc凝胶成像系统	Bio Rad Laboratories	1708265