用于抗体特异性分析的肽微阵列技术

Abstract

来源:Cornett， EM 等人 肽微阵列组蛋白抗体特异性分析。J. Vis. Exp. （2017 年）。

该视频演示了一种技术，该技术应用肽微阵列技术来分析识别组蛋白肽上翻译后修饰 （PTM） 的抗体的特异性。含有固定化荧光团偶联组蛋白肽和已知 PTM 组合的微阵列载玻片用靶标 PTM 特异性抗体处理。该过程有助于确定抗体对靶标的特异性及其与非靶标 PTM 的潜在交叉反应性。

Protocol

1. 设计阵列幻灯片和源板布局

1. 在 ArrayNinja 界面上的"规划幻灯片布局"标题下，单击与正在使用的微阵列打印机相对应的链接。
   注意:ArrayNinja 已被编程为模拟两种常用微阵列打印机的机器人运动（见表 1）。可根据要求配置与其他阵列仪的兼容性。
2. 在"Load plate"对话框中单击，键入"empty"，然后单击"enter"。参见图 1 以获取 ArrayNinja 设计模块的屏幕截图。
3. 将光斑直径调整为 275 μm，光斑间距为 375 μm。调整其余设置（板块/板行、板总行、重复、y 中的特征、超级阵列、SuperA 软糖;参见图 1）以自定义特征在微阵列切片上的显示方式。
   注意:光斑直径由微阵列针的大小决定。随着这些设置的调整，卡通幻灯片将实时更新。使用此卡通可预览每个设置如何修改最终的幻灯片版式。
4. 在完成幻灯片上的功能布局后，将鼠标悬停在每个唯一功能上，然后在弹出对话框中输入功能标识符。
   注意:特征标识符可以由数字、字母或组合组成。这仅对唯一要素是必需的，并且在选择复制时不会显示对话框。
5. 为所有独特功能分配标识符后，单击"填充"。输入幻灯片....

Results

图 1:ArrayNinja Design 模块。 虚线中显示了 ArrayNinja 设计模块的屏幕截图。控制面板（顶部）显示了可在微阵列打印机上更改的所有参数。调整这些参数时，幻灯片版式的卡通图像（左下角）会实时更新。设置布局后，用户可以将鼠标悬停在各个点上以输入唯一特征标识符。ArrayNinja 从该用户输入构建指定微阵列玻片布局所需的源板（右下角）中每个特征的位置图。

图 2:微阵列制造。 （A） 使用接触式微阵列打印机在链霉亲和素包被的显微镜载玻片上制备组蛋白肽微阵列。（B） 用 48 x 48 肽特征网格.......

Materials