使用免疫组化检测脑组织中异常的朊病毒蛋白

Abstract

来源:Orge， L. 等人 通过免疫组织化学检测异常朊病毒蛋白。J. Vis. Exp. （2023 年）。

该视频演示了一种使用免疫组织化学检测脑切片中错误折叠的朊病毒蛋白的技术。在用甲酸处理脑切片以使朊病毒变性并最大限度地降低感染风险，以及使用热诱导表位修复揭示朊病毒聚集体后，对切片进行错误折叠的朊病毒蛋白聚集体的免疫标记并在显微镜下观察。

Protocol

1. 组织切片和玻片制备

1. 使用切片机切割 3-5 μm 厚的福尔马林固定、石蜡包埋 （FFPE） 组织的切片。
2. 将切片漂浮到纯水中，温度比所用石蜡的熔点低约 10 °C。将切片从水中提起到经过特殊处理的显微镜载玻片上（参见材料表）。让水从载玻片上彻底排出。
3. 将载玻片在 50 °C 下孵育过夜，以增强组织的载玻片粘附。
   注意:最好为 IHC 方案准备新鲜切片的组织，但可以提前准备并储存 TSE 阳性和阴性对照切片。步骤 2 至 4 必须在化学通风橱中进行。

2. 脱蜡和再水化

1. 将带有组织切片的载玻片放入不锈钢染色篮中（参见材料表）。将篮子浸入二甲苯浴（不锈钢染色容器）中 3 分钟，取出并再次浸泡。
2. 去除二甲苯切片，将其浸入无水乙醇浴中 3 分钟，再水化。取出并再次浸入。
3. 风干切片，置于 90% 乙醇浴中 1 分钟，转移到 70% 乙醇浴中再转移一分钟，然后最后转移到 50% 乙醇浴中 1 分钟。对于每次乙醇浴处理，轻轻摇动载玻片篮两次，并在下一次转移前排空篮子。

3. 表位检索....

Materials