将 Aβ 肽特异性抗体和 Aβ 寡聚体可控灌注至大鼠海马区

摘要

来源：Sajadi, A.，等。通过渗透泵输注抗体治疗可抵消慢性β-淀粉样蛋白寡聚体输注动物模型中的神经退行性变。J. Vis. Exp. (2016)。

本视频演示了一种将淀粉样蛋白β（Aβ）肽特异性抗体持续灌注至大鼠海马区的技术。该研究采用植入双侧套管系统，以实现对Aβ肽特异性抗体的可控灌注，同时向大鼠海马区灌注可溶性Aβ寡聚体（Aβo），用于研究寡聚体与抗体之间的相互作用。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 立体定位手术前的导管准备

1. 剪取将用于连接套管与渗透压泵的PE50导管（长度为6 cm）（见图1）。用人工脑脊液（aCSF）填充PE50导管，并封闭导管两端。将导管置于4 °C保存，直至使用。

2. 通过立体定位进行套管植入

1. 在无菌条件下进行手术。通过高压灭菌法对所有手术器械和材料进行灭菌。彻底清洁立体定位仪及操作区域，并用70%乙醇溶液消毒。佩戴外科口罩、头帽和无菌手套。
2. 通过腹腔注射（i.p.）给予氯胺酮和赛拉嗪混合溶液（剂量分别为100 mg/kg和10 mg/kg）对大鼠进行麻醉。通过轻捏脚趾检查动物是否无反应，以确认麻醉效果。
3. 术前至少30分钟，对已麻醉动物皮下注射（s.c.）非甾体类抗炎药（美洛昔康；1 mg/kg）。
4. 使用电动剃毛器剃除动物头部毛发，并用2%葡萄糖酸氯己定与2%异丙醇混合溶液对皮肤进行三次消毒。在动物眼睛上涂抹兽用眼膏，防止麻醉期间角膜干燥。
5. 将动物固定于立体定位仪上，耳杆插入耳道。将一根导管固定在立体定位仪的持针器臂上。在动物头顶部位皮下注射局部麻醉剂（....

结果

图1. Aβo灌注期间双侧套管植入大鼠的动物照片。 使用连接至插入导向套管的内套管的PE50导管，将Aβo溶液（0.2 µg/µl；1 µl）每日一次、连续6天注入清醒且自由活动的大鼠体内。对照（Ctl）IgG1或6E10抗体通过置于动物肩胛骨之间皮下的渗透泵直接输注至Aβo灌注部位。

....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
人工脑脊液 (aCSF)	Harvard Apparatus	59-7316
PE50 导管薄壁	Plastics one	C232CT
盐酸氯胺酮 (100 mg/mL)	Bioniche	1989529
盐酸赛拉嗪 (100 mg/mL)	Bimeda	8XYL004C
美洛昔康 (5 mg/mL)	Norbrook	215670I01
2% 葡萄糖酸氯己定与 2% 异丙醇溶液	Carefusion	260100C
盐酸利多卡因	Alveda Pharma	0122AG01
盐酸布比卡因	Hospira	1559
眼科软膏	Bausch and Lomb inc.	2125706
立体定位仪框架	Stoelting	51600
立体定位套管固定臂	Harvard Apparatus	72-4837
钻机	Dremel	8050-N/18
引导套管	Plastics one	326OPG/spc
注射套管	Plastics one	C315I/spc
假性套管	Plastics one	C315DC/spc
涂层薇乔快线 4-0 缝合线	Ethicon	VR2297
牙科丙烯酸水泥	Harvard Apparatus	72-6906
螺钉	JI Morris Company	P0090CE125
6E10 抗体（小鼠 IgG1 同型）	BioLegend	803003
小鼠 IgG1 同型对照抗体	Abcam	AB18447
Alzet 渗透压泵型号 1007D	Durect corporation	290
异氟烷	Baxter	CA2L9100
β-淀粉样蛋白 1-42	rPeptide	A-1163-1
哈密尔顿注射器 (10 µL)	Fisher Scientique	14815279
输注注射泵 CMA 402	Harvard Apparatus	CMA8003110
1 mL 注射器	BD	309659
21G 针头	Terumo	NN-2125R
Snuggle	Lomir Biomedical	RTS04