在无血清单层培养中由胚胎干细胞生成神经前体细胞

本文内容

摘要

该视频展示了一种利用无血清培养基从小鼠胚胎干细胞诱导生成神经前体细胞的实验方案。将处于无血清培养基中的胚胎干细胞以适宜浓度接种于明胶包被的盖玻片上。在最佳细胞密度下，细胞会分泌自分泌信号因子，这些因子与无血清培养基中的神经分化诱导因子共同作用，触发胚胎干细胞向神经前体细胞分化。

方案

1. 培养基制备

注意：该方案依赖于使用两种不同培养基的混合物：添加了改良N2补充剂的DMEM/F12培养基，以及添加了B27补充剂的Neurobasal培养基，通常按1:1比例混合使用。

通过在15 ml离心管中混合各组分来配制改良N2补充剂。切勿涡旋或过滤该溶液；通过反复倒置离心管直至溶液澄清来进行混匀。
1. 首先用移液器加入7.2 ml DMEM/F12，然后加入1 ml浓度为25 mg/ml的胰岛素溶液（溶于0.01 M HCl中），通过反复倒置离心管充分混匀。溶液澄清约需几分钟时间。
2. 加入1 ml浓度为100 mg/ml的apo-转铁蛋白溶液（溶于水中）、33 µl浓度为0.6 mg/ml的孕酮溶液（溶于乙醇中）、100 µl浓度为160 mg/ml（1 M）的腐胺溶液（溶于水中）、10 µl浓度为3 mM的亚硒酸钠溶液（溶于水中）以及666 µl浓度为7.5%的牛血清白蛋白溶液，并充分混匀。将溶液分装为每份2.5 ml，于-20 °C保存，可保存长达2个月。
配制培养基。
1. 向250 ml DMEM/F12培养基中加入2.5 ml N2补充剂。充分混匀，但不要振荡或过滤。
2. 向250 ml Neurobasal培养基中加入5 ml B27补充剂....

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材料

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