来源：Gottschling, C. 等 间接神经元-星形胶质细胞共培养实验：一种 体外 神经元-胶质细胞相互作用精细研究的实验装置 视频实验杂志 (2016)
本视频展示了一种采用区室化方法建立间接神经元-星形胶质细胞共培养的技术。在此体系中，神经元与星形胶质细胞在空间上相互分离，但共享一种条件培养基。星形胶质细胞释放的神经营养因子可促进神经元分化及突触连接的形成，提示存在神经元-胶质细胞间的相互作用。
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方法文章
一种用于研究神经元-胶质细胞相互作用的间接神经元-星形胶质细胞共培养技术
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。
1. 皮层星形胶质细胞的制备与培养
注意：请在进行后续步骤前至少提前 7 天完成本方案的这些步骤，因为星形胶质细胞培养物需在神经元制备前形成融合的单层。原代星形胶质细胞来源于出生后第 0–3 天（P0–3）小鼠幼崽的混合胶质细胞培养物。每瓶 T75 培养瓶使用三只小鼠（6 个皮层）。
- 在无菌条件下，通过向杜氏改良伊格尔培养基（DMEM）中添加10% v/v 马血清和0.1% v/v 庆大霉素配制星形胶质细胞培养基。将培养基于4 °C保存，最多可保存2周。
- 用 10 µg/mL 的试剂包被 3 个 T75 培养瓶 聚-D-赖氨酸（PDL；溶于细胞培养级水）孵育至少1小时 在37 °C、6% v/v CO存在条件下2包被后，用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤烧瓶两次，以去除未结合的阳离子，并加入9 mL 星形胶质细胞培养基
- 脑组织制备时，加入10 mL Hank's 平衡盐溶液（HBSS）至 1x 10 cm 培养皿，加入 1 mL 将HBSS加入1个15 mL离心管中（无论使用脑组织的数量）。操作时，将一把手术剪、两把精细镊子和一台体视显微镜置....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 试剂 | |||
| B27 | Gibco（Life Technologies） | 17504-044 | |
| 细胞培养级水 | MilliQ | ||
| 细胞培养级水 | MilliQ | ||
| 阿糖胞苷（Cytosine-ß-D arabinofuranoside, AraC） | Sigma-Aldrich | C1768 | 警告：H317，H361 |
| DMEM | Gibco（Life Technologies） | 41966-029 | |
| DNA酶 | 沃辛顿 | LS002007 | |
| 庆大霉素 | Sigma-Aldrich | G1397 | 警告：H317-334 |
| 葡萄糖 | Serva | 22700 | |
| HBSS | Gibco（Life Technologies） | 14170-088 | |
| HEPES | Gibco（Life Technologies） | 15630-056 | |
| 马血清 | Biochrom AG | S9135 | |
| L-半胱氨酸 | Sigma-Aldrich | C-2529 | |
| MEM | Gibco（Life Technologies） | 31095-029 | |
| 卵清蛋白 | Sigma-Aldrich | A7641 | 警告：H334 |
| 木瓜蛋白酶 | Worthington | 3126 | |
| PBS | 自制 | ||
| 聚-D-赖氨酸 | Sigma-Aldrich | P0899 | |
| Poly-L-ornithine | Sigma-Aldrich | P3655 | |
| 丙酮酸钠 | Sigma-Aldrich | S8636 | |
| 胰蛋白酶-EDTA | Gibco（Life Technologies） | 25300054 | |
| 仪器设备 | |||
| 24孔板 | Thermo Scientific/Nunc | 142475 | |
| 24孔板（用于 间接共培养 | BD Falcon | 353504 | |
| 双目 | Leica | MZ6 | |
| 细胞培养小室 | BD Falcon | 353095 | |
| 离心 | Heraeus | Multifuge 3S-R | |
| 计数室 | Marienfeld | 650010 | |
| 镊子 | FST Dumont（#5） | 11254-20 | |
| 玻璃盖玻片（12 mm） | 卡尔·罗思（门泽尔-格拉泽） | P231.1 | |
| 培养箱 | 赛默飞世尔科技 | Heracell 240i | |
| 微量离心管（2 ml） | Sarstedt | 72,691 | |
| 显微镜 | Leica | DMIL | |
| Millex 注射器驱动滤器单元 | Millipore | SLGV013SL | |
| 轨道摇床 | 新不伦瑞克科学仪器公司 | Innova 4000 | |
| Parafilm | 贝米斯 | PM-996 | |
| 培养皿（10 cm） | Sarstedt | 8,33,902 | |
| 移液器（1 ml） | Gilson | Pipetman 1000 | |
| 无菌工作台 | The Baker 公司 | 层流无菌洁净台 SterilGARD III | |
| 手术剪刀 | FST Dumont | 14094-11 | |
| 注射器 | Henry Schein | 9003016 | |
| T75 培养瓶 | Sarstedt | 83,39,11,002 | |
| 管（15 ml） | Sarstedt | 6,45,54,502 | |
| 水浴锅 | GFL | 水浴锅型号1004 |
