使用塑料微流控芯片的区室化原代小鼠神经元培养

摘要

来源：Nagendran, T.，等。使用预组装塑料微流控芯片对原代小鼠神经元进行区室化培养。J. Vis. Exp. (2018)。

本视频展示了使用预组装的塑料微流控芯片对原代大鼠海马神经元进行区室化培养的方法。将神经元接种至微流控芯片的一个区室中，神经元在此附着并生长，并通过芯片中的微沟槽将其轴突延伸至相邻区室。由于微沟槽较窄，可阻止神经元胞体进入，从而实现胞体区室与轴突区室之间的物理分离。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 多室芯片的制备与包被

1. 在生物安全柜中，将芯片放入培养皿或其他合适的无菌容器中。
2. 向芯片的左上孔加入 100 µL 预包被液，使其流经主通道进入相邻的孔。
   注意：预包被液用于预先包被微流控通道，以避免芯片内形成气泡。
3. 向左下孔加入 100 µL 预包被液。等待 5 分钟，使溶液流过微沟槽。
4. 向芯片的右上孔加入 100 µL 预包被液，使其流经主通道进入相邻的孔。向右下孔加入 100 µL 预包被液。
5. 从各孔中吸除溶液。吸液时移液枪头应远离主通道，以避免吸走主通道中的液体 (图 1A)。立即向左上孔加入 150 µL 磷酸盐缓冲液 (PBS)。等待 1.5 分钟。
   注意：切勿将封闭的主通道中的液体全部吸除。
6. 向左下孔加入 150 µL PBS。等待 5 分钟，使液体流过微沟槽。向右上孔加入 150 µL PBS。向右下孔加入 150 µL PBS。等待 10 分钟。
7. 重复步骤 1.5–1.6，进行第二次 PBS 洗涤。
8. 在组织培养显微镜下检查芯片主通道中是否存....

结果

图 1. 使用塑料多室芯片时需要掌握移液技术。 （A）在添加或吸出洗涤液时，移液器吸头应如图所示朝向主通道入口的反方向倾斜。（B）在接种神经元或进行轴突切断操作时，移液器吸头应朝向主通道入口的方向倾斜。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
XonaChip	Xona Microfluidics LLC	XC150	150 µm 长度的微沟槽屏障
	Xona Microfluidics LLC	XC450	450 µm 长度的微沟槽屏障
	Xona Microfluidics LLC	XC900	900 µm 长度的微沟槽屏障
XC pre-coat	Xona Microfluidics, LLC	XC Pre-Coat	随 XonaChips 提供
XonaPDL	Xona Microfluidics, LLC	XonaPDL
神经元培养基
Neurobassal 培养基	ThermoFisher Scientific	21103049
B-27 Plus 补充剂 (50x)	ThermoFisher Scientific	A3582801
GlutaMAX 补充剂	ThermoFisher Scientific	35050061
抗生素-抗真菌剂 (100x)	ThermoFisher Scientific	15240112
氟化乙烯丙烯薄膜	American Durafilm	50A	0.5 mil 厚度
玻璃巴斯德吸管	Sigma-Aldrich	CLS7095D5X SIGMA	5.75 英寸长度
PBS (10x)	ThermoFisher Scientific	QVC0508
培养箱，5% CO2，37 °C