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准备楔形脑切片以可视化听觉神经元

2025年7月8日

本文内容

摘要

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来源:Fischl， MJ et al.， 模拟体内神经元回路连接的体外楔形切片制备。J. Vis. Exp.（2020 年）

该视频演示了在实验室环境中制备楔形脑切片的过程。使用振动切片机，从小鼠的大脑中制作出具有不同厚度的楔形切片。该切片包含位于较粗端的听觉神经根，而与听力相关的神经元位于较细的一端。

方案

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所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 用完整的听觉神经根去除大脑进行刺激

注意:这些实验的小鼠是通过在 C57BL/6J 背景下将 ChAT-IRES-Cre 转基因小鼠与 tdTomato 报告小鼠 （Ai14） 杂交获得的。用于组织学和电生理学的小鼠是听力后发作 （P14-P23），在小鼠中约为 P12。在梯形体 （VNTB） 的腹侧核中表达 tdTomato 的神经元以前在该小鼠系中被表征为内侧橄榄耳蜗 （MOC） 神经元。

  1. 使用经批准的机构程序对动物实施安乐死（例如，CO2 窒息）和斩首。
  2. 使用剃须刀片，从鼻子到脖子后部切开颅骨中线的皮肤。剥开皮肤，露出头骨。
  3. 使用小剪刀，通过中线在颅骨上切开一个切口，从颅骨的底部（靠近脊髓的尾端）开始，一直向鼻子方向。
  4. 在 lambda 缝合处，从中线在颅骨上切开，两侧外侧朝耳朵。剥开头骨，露出大脑。
  5. 从喙端开始，用小实验室刮刀或钝镊子轻轻地将大脑从颅骨上提起。切断视神经并继续轻轻地向后工作大脑，露出腹面。
  6. 在脑干腹面附近用细镊子捏住三叉神经，切断三叉神经。
    注意:小....

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结果

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图 1:楔形切片示意图和示例图像。（A） 内侧橄榄耳蜗反馈电路的示意图。蓝色箭头表示 MOC 神经元的传入上行通路，黑色箭头表示从 MOC 神经元到外毛细胞 （OHC） 基部的下行反馈通路。（B） 楔形切片的明场图像，厚侧有听觉神经根 （ANR） 和耳蜗核（虚线轮廓）的标签。星号表示梯形体腹侧核的大致位置，其中 MOC 神经元在楔形切片的薄侧进行膜片夹。黑色虚线表示面神经，可以在喙面切片的两个半球看到。IHC - 内毛细胞，GBC - 球状浓密细胞，SPN - 上叶旁核，MNTB - 梯形体的内侧核，VNTB - 梯形体的腹侧核，LSO - 外侧上橄榄。

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材料

<表格border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> 本文使用的材料清单 姓名 公司 目录编号 评论 实验准备 琼脂、粉末 Fisher Scientific 公司 BP1423500 4% 琼脂块用于在振动切片机切片过程中稳定脑组织 AlexaFluor 酰肼 488 Invitrogen 公司 编号 A10436 在内部溶液中使用荧光基团以确认 MOC 神经元修补成功 分析天平 Geneses Scientific （Intramalls） AV114的 称量化学品 双刃剃须刀片 泰德·佩拉 121-6 振动切片机切割刀片 犬尿喹啉酸 （5g） 西格玛·奥尔德里奇 K3375-5G 系列 切片 ACSF 添加剂，用于减少解剖和切片过程中的神经元活动，以改善膜片钳的组织健康 pH 计 Fisher Scientific （Intramalls） 电话:13-620-451 溶液 pH 测试仪 塑料培养皿 100mm 直径 X 20mm Fisher Scientific （Intramalls） 12-556-002 4% 琼脂制备 搅拌加热板 Fisher Scientific （Intramalls） 11-500-150 加热 4% 琼脂制备 解剖和切片 生物胞素 西格玛·奥尔德里奇 B4261-250 毫克 用于轴突示踪的化学物质（与链霉亲和素 488 偶联） 解剖显微镜 安倍 SM-10 亿 用于脑切除过程中的精确解剖 Dumont #5 镊子 精细科学工具 11252-20 细镊子解剖工具 经济型镊子 #3 WPI 501976 镊子解剖工具 玻璃培养皿 150mm 直径 x 15mm 高 Fisher Scientific （Intramalls） 08-747E 解剖皿 接口纸（203 X 254mm PCTE 膜 10um） 托马斯科学公司 1220823 切片孵育/生物胞素应用 Leica VT1200S 振动切片机 徕卡 编号 1491200S001 用于楔形切片的振动切片机 梅奥剪刀 罗博兹 RS-6872 系列 解剖工具 单刃碳钢叶片 Fisher Scientific （Intramalls） 12-640 用于解剖的剃须刀片 标本盘，定向 徕卡 14048142068 专用振动切片机载物台，可实现可重复的倾斜 Spoonula 餐厅 费舍尔科学 14-375-10 解剖工具 强力胶 新蛋 15187 用于将组织粘合到振动切片机舞台上 Vannas 弹簧剪刀 精细科学工具 编号:91500-09 解剖工具

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