来源：Koss，K. M, 等 改良的原代胶质细胞三维水凝胶培养方法 体外 神经炎症的建模 视频实验杂志 (2017).
本视频展示了一种建立胶质细胞三维培养的技术。将来源于大鼠脑的胶质细胞包埋在含有细胞外基质成分的光交联聚合物基质中。在培养基中孵育后，胶质细胞在支撑基质内增殖，形成三维培养体系。
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方法文章
建立大鼠脑源性胶质细胞的三维培养
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
使用断头法处死出生第1天的Sprague Dawley大鼠幼鼠以提取脑组织的实验方案，已获得阿尔伯塔大学动物护理与使用委员会的批准。
1. 小胶质细胞和星形胶质细胞的分离
注意： 所有用于分离和细胞培养的培养基均在水浴中预热至 37 °C。Hank's 平衡盐溶液（HBSS）含有 1% 青霉素-链霉素（PS）。所有添加 Ham's F12 营养混合物的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基（DMEM/F12）均补充有 10% 胎牛血清（FBS）和 1% 青霉素-链霉素（PS）。仅含胰蛋白酶的混合液不含 FBS。本实验方案中的所有材料均为无菌（经过滤、酒精处理、购买时无菌或经高压灭菌），自步骤 1.8 之后的所有操作均在生物安全柜中采用无菌技术进行。
- 每个大脑，预先将 15 mL HBSS 和 12.5 mL DMEM/F12 在 50 mL 锥形离心管中加热至 37 °C，并在 15 mL 锥形离心管中预热约 2 mL 含 1 mM 乙二胺四乙酸（EDTA）的 0.25% 胰蛋白酶。额外加热 25 mL DMEM/F12。使用前约 10 分钟预热胰蛋白酶，以防止酶活性丧失。
- 将足够量的预热 HBSS 倒入无菌的 6 cm 和 10 cm 培养皿中，以覆盖皿底表面。每两个大脑准备一个 10 cm 培养皿，另....
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结果
图1：出生第1天Sprague Dawley大鼠幼鼠脑组织的解剖。 全脑图像（A），大脑皮层与小脑的分离过程（B），带有脑膜的单侧大脑皮层（C），使用镊子剥离脑膜（D），以及去除脑膜后的大脑皮层（E）。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 1. HAMA 合成与光聚合所需材料 | |||
| 透明质酸（HA） | Sigma-Aldrich | 53747-10G | 来源于 Streptococcus equi，分子量：1.5 - 1.8 × 10⁶ |
| 甲基丙烯酸酐（MA） | Sigma-Aldrich | 275585-100ML | |
| 氢氧化钠（NaOH） | Sigma-Aldrich | 221465-25G | |
| 乙醇（EtOH） | Commerical Alcohols Inc. | 无水 | |
| 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）片剂 | Fisher Scientific | 18912014 | |
| 三乙醇胺（TEA） | Sigma-Aldrich | 90279-100ML | |
| 1-乙烯基-2-吡咯烷酮（NVP） | Sigma-Aldrich | V3409-5G | |
| 伊红Y（EY） | Sigma-Aldrich | E6003-25G | |
| 聚二甲基硅氧烷（PDMS）Sylgard 184 硅胶弹性体套件 | Dow Corning | ||
| 3-(三甲氧基硅基)丙基甲基丙烯酸酯 | Sigma-Aldrich | 440159-100ML | |
| 烧杯（100 mL） | Corning | 1000-100 | |
| 烧杯（500 mL） | Corning | 1000-600 | |
| pH 试纸（Labstick） | Sigma-Aldrich | 9580 | |
| 2. 胶质细胞分离与细胞培养所需材料 | |||
| P1-2 龄 Sprague Dawley 大鼠幼崽 | Charles River | CD Sprague Dawley 大鼠品系编号 001 | |
| 解剖剪刀 - 细刃（小号） | Fine Science Tools | 14081-09 | |
| 手术剪刀 - Toughcut（大号） | Fine Science Tools | 14130-17 | |
| 精细镊子（Dumont #5） | Fine Science Tools | 11521-10 | |
| 弯头精细镊子（Dumont #7） | Fine Science Tools | 11271-30 | |
| Hank's 平衡盐溶液（HBSS） | Gibco | 14170-112 | |
| DMEM/F12 培养基（Dulbecco 改良 Eagle 培养基与 Ham's F-12 营养混合物） | Gibco | 11320-033 | |
| 青霉素-链霉素（PS） | Gibco | 15140-122 | |
| 胎牛血清（FBS） | Gibco | 12483-020 | |
| 0.25% 胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（EDTA） | Gibco | 25200-072 | |
| 聚-L-赖氨酸（PLL） | Sigma-Aldrich | P-6282 | |
| 50 mL 圆锥形离心管 | Fisher Scientific | 05-539-13 | |
| 15 mL 圆锥形离心管 | Fisher Scientific | 05-539-5 | |
| 12 孔组织培养处理板（Cellstar） | Greiner Bio-One | 665 108 | |
| 10 mL 移液管 | Fisher Scientific | 13-676-10F | |
| 25 mL 移液管 | Fisher Scientific | 12-676-10K | |
| 培养皿（60 mm × 15 mm） | Fisher Scientific | FB0875713A | |
| 培养皿（100 mm × 15 mm） | Fisher Scientific | FB0875712 | |
| 显微镜盖玻片（18 mm） | Fisher Scientific | 12-545-100 18CIR |
