将造血祖细胞直接重编程为神经干细胞

摘要

来源:Wang， T. 等人 从外周血造血祖细胞直接诱导人神经干细胞。J. Vis. Exp， （2015）

该视频演示了转基因造血祖细胞直接重编程为神经元干细胞的过程。造血祖细胞表达的转录因子触发一连串分子事件，促进其转化。进一步的特异性培养基用于选择和培养诱导的神经元干细胞。

方案

1. 神经干细胞诱导

注意:根据细胞状况，转染后约 5 或 7 天，单层贴壁细胞将达到 30 - 50% 汇合度（图 1C）。

1. 去除含有漂浮细胞和球体的上清液，然后将 1 ml 神经祖细胞培养基（Dulbecco 改良 Eagle 培养基:营养混合物 F-12 （DMEM/F12），含有 1x N2 补充剂、0.1% （w/v） 牛血清白蛋白 （BSA）、1% （v/v） 抗生素、20 ng/ml 碱性成纤维细胞生长因子 （bFGF） 和 20 ng/ml 表皮生长因子 （EGF））加入贴壁细胞中。
2. 或者，通过轻轻移液并以 170 x g 离心细胞 10 分钟来解离细胞球。去除上清液，并将细胞重悬于 1 ml 神经祖细胞培养基中，溶于涂有基质胶的新 24 孔板中作为备份。
3. 每隔一天更换一次培养基，直到细胞达到 60 - 80% 汇合，通常在 1 周后。
4. 弃去上清液，加入 1 ml 神经干细胞培养基（无血清培养基，NSC SFM）。使用细胞刮刀解离细胞，然后非常轻柔地移液。
5. 取出细胞并将它们全部接种到 6 孔板的一个孔中。再加入 1 ml 神经干细胞培养基，为每个孔制备 2 ml 培养基。将细胞在 37 °C 下在 5% CO₂ 培养箱中孵育。
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结果

图 1.仙台病毒转染后 CD34 细胞的形态学变化。（A） 转染时可观察到大量 CD34 细胞。（B） 仙台病毒转染后 24 小时可以观察到球状细胞聚集体，该聚集体会随着时间的推移而扩大。（C） 大多数情况下，双极贴壁细胞在转染 5 天后出现。（D 和 E） 神经干细胞的典型形态显示在用神经祖细胞培养基诱导和扩增后。比例尺:（A） 和 （B） 为 200 μm，其他为 400 μm。

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材料