诱导神经前体细胞向星形胶质细胞的分化

摘要

来源：Meyer, S.，等，Edenhofer, F. 成人人类成纤维细胞的分离及其直接转化为可扩增的神经前体细胞。J. Vis. Exp. (2015)

本视频展示了使用专用培养基将诱导性神经前体细胞（iNPCs）分化为神经元和星形胶质细胞的过程。

方案

1. iNPCs 的分化

1. 向神经元谱系分化​
   1. 将细胞培养于包被有层粘连蛋白的培养板上，方法如上所述。当细胞融合度约为70%时，更换为神经分化培养基（DMEM/F-12，1× N2，1× B27，300 ng/ml cAMP，200 µM 维生素C，10 ng/ml BDNF，10 ng/ml GDNF）。每两天更换一次培养基，持续三周。分化期间不要传代细胞。
   2. 三周后，细胞应表达神经元标志物TUJ1。若需获得更成熟的神经元及不同神经元亚型，可继续分化长达3个月。
2. 向胶质谱系分化
   1. 更换为胶质诱导培养基（1:1 DMEM/F-12 : Neurobasal，1× N2，1× B27，10 µM β-巯基乙醇，100 µM 非必需氨基酸，1.5 mM L-谷氨酰胺，5 µg/ml 胰岛素，40 ng/ml T3），并加入20 ng/ml EGF以诱导细胞向胶质前体细胞分化。每两天更换一半培养基并补充新鲜培养基，持续约2周。在此期间，当细胞达到100%融合时，以1:3比例传代，并在含有10 µM ROCK抑制剂Y27632的培养基中进行。
   2. 两周后，进一步将细胞诱导为星形胶质细胞：当细胞接近融合时，更换为市售的星形胶质细胞培养基，每两天更换一次培养基。约7天后，细胞开始表达星形胶质细胞标志物（例如，GFAP）。若在分化过程中细胞达到100%融合，应以1:2比例传代，并在含有10 µM ROCK抑制剂Y27632的培养基中进行。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
星形胶质细胞培养基	ScienCell	1801
B27	LifeTechnologies	17504-044
BDNF	Peprotech	450-02
cAMP	Sigma	A6885
DMEM	LifeTechnologies	41966-029
DMEM F12	LifeTechnologies	11320-033
DMSO	Roth	4720
DPBS	LifeTechnologies	14190-094
EGF	Life Technologies	PHG0313
FCS	Biochrom AG	50115
GDNF	Peprotech	450-10
胰岛素	Seralab	GEM-700-112-P
L-谷氨酰胺	LifeTechnologies	25030-024
层粘连蛋白	Sigma	L2020
N2	LifeTechnologies	17502-048
Neurobasal	LifeTechnologies	21103-049
非必需氨基酸	LifeTechnologies	11140-050
维生素C	Sigma	A4544
β-巯基乙醇	LifeTechnologies	21985023