启动快速神经突延伸及功能性神经元连接的形成

摘要

来源：M. H. Magdesian 等，《重新连接神经回路：一种快速神经突延伸与功能性神经元连接的新方法》，J. Vis. Exp. (2017)，https://app.jove.com/v/55697

本视频展示了一种利用微流控装置和显微操作技术快速启动神经元生长、延伸并建立与目标神经元新连接的方法。该技术可用于旨在修复创伤后或神经退行性疾病中神经元环路连接的治疗策略。

方案

1. 使用微流控装置标准化神经元培养：装置组装

1. 为所需的实验选择合适的微流控装置。为了连接同一群体内的神经元，请使用神经元装置（Neuro Devices）图1），并使用共培养装置（Co-Culture Devices）连接不同群体的神经元，图2).
2. 清洁并准备所需数量的无菌盖玻片或玻璃底培养皿。在塑料表面培养时，建议使用35 mm培养皿；在玻璃表面培养时，建议使用25 mm盖玻片或35 mm玻璃底培养皿。根据成像系统选择合适的玻璃厚度，例如0.15 mm。
3. 用 0.5–1 mL 浓度为 100 µg/mL 的 PDL 在室温下孵育 2 小时或过夜，以包被培养皿或盖玻片。
   注意： 此处可暂停实验方案，必要时于次日继续。此外，培养皿可用硼酸盐缓冲液稀释的PDL、Poly-L-Lysine（PLL）、层粘连蛋白（laminin）或任何其他细胞黏附分子进行包被。
4. 用清水洗涤培养皿两次（不要使用磷酸盐缓冲液（PBS），因为盐晶体可能会堵塞通道），移除所有液体，并在无菌环境（如生物安全柜）中干燥5-10分钟，或直至表面完全干燥。
   注意： 务必确保盖玻片完全干燥，因为残留的液体会影响微流控系统的黏附。
5. 将微流控装....

结果

图1：利用微流控装置标准化神经元培养7。（a）装置组装：将微流控装置正确组装在干燥表面上时，所有腔室均可见。（b）细胞接种：将细胞接种于右上侧孔中，细胞应向左侧孔移动。（c）细胞密度：接种后立即在显微镜下检查细胞浓度是否合适。（d）培养1天后，海马神经元已良好贴附于微通道附近，并开始形成神经突。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
神经设备	Ananda Devices		可从 http:// www.anandadevices.com 购买
1 号圆形玻璃盖玻片，直径 25 mm	Warner Instruments	64-0705
35 mm 细胞培养皿，无热原，无菌	Corning Inc	430165
95 mm × 15 mm 培养皿，可滑动盖，无菌聚苯乙烯	Fisherbrand	FB0875714G
Neurobasal 培养基	Life Technologies	21103-049	细胞外溶液
B-27 添加剂（50X），无血清	Thermo Fisher Scientific	17504044	细胞外溶液
青霉素、链霉素、谷氨酰胺	Thermo Fisher Scientific	11995-065	细胞外溶液
2 – 20 μL 移液器，抗气溶胶吸头	Thermo Fisher Scientific	2149P
Dumont Dumostar 镊子，11 cm	World Precision Instruments	500233
解剖工具	Braun, Aesculap
聚-D-赖氨酸氢溴酸盐	Sigma-Aldrich	P6407
基于聚苯乙烯的微粒，10 μm	Sigma-Aldrich	72986
水平移液管拉制仪	Sutter Instruments	Brown-Flaming P-97
显微操作器，PCS-5000 系列 MC7600R	SD Instruments	MC7600R
1 mL 注射器	BD Luer-Lok	309628
倒置显微镜	Olympus	IX71
物镜 UIS2	Olympus	LUCPLFLN 40X
CCD 相机	Photometrics	Cascade II: 512