分离与培养弥散性内生性脑桥胶质瘤细胞

摘要

来源：Lin, G. L. 等，弥漫性内生型桥脑胶质瘤（DIPG）快速死后细胞培养方案。J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了从弥散性内生型桥脑胶质瘤（DIPG）患者脑干组织中分离和培养胶质前体细胞的过程。从肿瘤组织中分离的胶质细胞 通过 在神经基础培养基中培养经酶消化的细胞，该培养基可促进细胞生长及悬浮神经球的形成。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 获取组织样本

注意：本方案的一个关键步骤是在尸体解剖后立即正确处理组织捐献。样本的整体活性在很大程度上取决于尽量缩短死后间隔时间（Post-Mortem Interval, PMI），立即将组织转移至含有抗生素/抗真菌剂的适当低温保存液中，在运输过程中始终将样本置于湿冰上，并在整个操作过程中保持无菌技术。

1. 接到即将进行捐赠的通知后，准备样本采集包。使用带有隔热容器的运输箱，该容器可直接用于组织样本的返程运输，并包含以下材料：
   1. 准备无菌操作所需材料，包括无菌手套、无菌巾和手术刀。
   2. 在隔热容器中放入8至10个无菌的50 mL锥形管，每管含30 mL运输培养基，并加入冰块或冷袋。
      注意：尽管任何标准细胞培养基均可使用，但使用添加了抗生素/抗真菌剂的Hibernate-A培养基可获得最佳的样本活性。
   3. 根据其他分析需求（例如，固定剂），额外准备相应的样本管。
   4. 若解剖不在研究者所在机构进行，需附上一份明确说明如何采集肿瘤样本的文件。内....

结果

图1. 脑桥肿瘤的尸检样本。弥漫性内生性脑桥胶质瘤在死亡后立即呈现的外观。该肿瘤表现为位于脑桥腹侧表面的较大、富含髓鞘的肿块。

图 2. 组织样本在不同处理阶段的状态。（A.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Hibernate-A	Gibco	A12475-01
含钙/镁的HBSS	Gibco	24020-117
HBSS	Corning	21-022-CV
HEPES	Gibco	15630-080
Liberase DH（胶原酶/分散酶）	Roche	5401054001
DNA酶I	Worthington Biochemical	LS002007
蔗糖	Sigma	S0389
抗生素/抗真菌剂	Gibco	15240-096
Neurobasal-A	Gibco	10888-022
DMEM/F12	Gibco	11330-032
GlutaMAX-I (100X)	Gibco	35050-061
丙酮酸钠 (100 mM)	Gibco	11360-070
B27补充剂（不含维生素A）	Gibco	12587-010
MEM非必需氨基酸 (100X)	Gibco	11140-050
人PDGF-AA	Shenandoah Biotechnology	100-16
人PDGF-BB	Shenandoah Biotechnology	100-18
人EGF	Shenandoah Biotechnology	100-26
人FGF	Shenandoah Biotechnology	100-146
无菌手术刀片	Bard Paker	372610
弯止血钳	Fine Science Tools	13013-14
剃须刀片	VWR	55411-050
100 × 20 mm细胞培养皿	Corning	353003
无菌镊子	TWD Tradewinds	DF8988-5
无菌手术单	3M	2037
无菌手套	Kimberly Clark	1182307
ACK裂解缓冲液	Gibco	A1049201
100微米筛网滤器	Fisher	352360
50 mL锥形管	Fisher	1495949A