一种生成少突胶质细胞条件培养基的方法

摘要

来源：Mazuir, E.，等。少突胶质细胞及其条件培养基的制备用于共培养实验。J. Vis. Exp. (2020)

本视频展示了通过施加刺激以促进少突胶质细胞系细胞释放分子，从而制备少突胶质细胞条件培养基（OCM）的方法。该培养基富含生长因子、细胞因子及其他生物活性分子，可添加至神经元培养体系中，用于研究少突胶质细胞分泌因子对神经元生理功能及连接性的影响。

方案

1. 少突胶质细胞系（OL）细胞的收获与培养

注意：这些步骤应在层流罩内的无菌条件下进行。

1. 摇床振荡后的第二天，根据表1配制Bottenstein-Sato（BS）培养基。
2. 用无菌蒸馏水将包被的培养皿清洗3次。
3. 收集含有主要为少突胶质细胞系细胞以及部分小胶质细胞的培养瓶上清液，并将其接种至未包被的100 mm培养皿中。
   注意：此步骤可通过小胶质细胞在培养皿表面差异性快速贴壁的特性将其去除。
4. 将培养皿置于37 °C、5% CO₂的湿润培养箱中孵育15分钟。
5. 向每个T150培养瓶中加入25 mL温热的新鲜配制的培养基，并在37 °C、5% CO₂的湿润培养箱中孵育，直至进行第二次摇床振荡。
6. 将培养皿中的上清液转移至新的未包被的100 mm培养皿中，以使残留的小胶质细胞进一步贴壁。
7. 将培养皿置于37 °C、5% CO₂的湿润培养箱中孵育15分钟。
8. 移除含有非贴壁的少突胶质细胞系细胞的上清液，并将其转移至50 mL离心管中（每2个培养皿的上清液合并至1个50 mL离心....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
B27 添加剂	ThermoFisher	17504044
D-(+)-葡萄糖溶液	Sigma	G8769
DMEM培养基（Dulbecco改良Eagle培养基）	ThermoFisher	31966021
100% 乙醇	Sigma	32221-M
70% 乙醇	VWR Chemicals	83801.36
胎牛血清	ThermoFisher	10082147
Neurobasal 培养基	ThermoFisher	21103049
青霉素-链霉素	ThermoFisher	15140122
不含钙和镁的磷酸盐缓冲液（PBS）	ThermoFisher	A1285601
聚乙烯亚胺（PEI）	Sigma	P3143
Bottenstein-Sato (BS) 培养基
人脱铁转铁蛋白（apo-Transferrin human）	Sigma	T1147
牛血清白蛋白（BSA）	Sigma	A4161
DMEM培养基（Dulbecco改良Eagle培养基）	ThermoFisher	31966021
胰岛素	Sigma	I5500
血小板源性生长因子（PDGF）	Peprotech	AF-100-13A
青霉素-链霉素	ThermoFisher	15140122
孕酮	Sigma	P8783
盐酸亚精胺（Putrescine dihydrochloride）	Sigma	P5780
亚硒酸钠	Sigma	S5261
T3（3,3',5-三碘-L-甲状腺原氨酸钠盐）	Sigma	T6397
T4（L-甲状腺素）	Sigma	T1775
工具
0.22 µm 滤器	Sartorius	514-7010
1 mL 注射器	Terumo	1611127
100 mm 培养皿	Dutscher	193100
15 mL 离心管	Corning Life Science	734-1867
50 mL 离心管	Corning Life Science	734-1869
60 mm 培养皿	Dutscher	67003