一种生成少突胶质细胞条件培养基的方法

Abstract

来源:Mazuir， E. 等人。用于共培养实验的少突胶质细胞和少突胶质细胞条件培养基的生成。J. Vis. Exp.（2020 年）

该视频演示了通过对少突胶质细胞系细胞进行应激以增强其分子释放到培养基中，从而从少突胶质细胞谱系细胞中生产少突胶质细胞条件培养基 （OCM）。这种培养基富含生长因子、细胞因子和其他生物活性分子，可以添加到神经元培养物中，以深入了解少突胶质细胞分泌因子对神经元生理学和连接性的影响。

Protocol

1. OL 谱系 （OL） 细胞收获和培养

注意:这些步骤应在无菌条件下在层流罩中进行。

1. 摇动后的第二天，根据表 1 准备 Bottenstein-Sato （BS） 培养基。
2. 用无菌蒸馏水冲洗涂有培养皿的培养皿 3 次。
3. 收获烧瓶的上清液，主要含有OL谱系细胞，但也含有一些小胶质细胞，并将其接种在未包被的100 mm培养皿上><。 注意:此步骤允许通过培养皿表面的差异快速粘附去除小胶质细胞。
4. 将培养皿在 37 °C 的加湿培养箱中，在 5% CO₂ 下孵育 15 分钟。
5. 在每个 T150 培养瓶中加入 25 mL 新鲜制备的温热培养基，并在 37 °C 的加湿培养箱中，在 5% CO₂ 下孵育，直至第二次振荡。
6. 将上清液从培养皿转移到新的未包被的 100 mm 培养皿中，以允许残留的小胶质细胞粘附。
7. 将培养皿在 37 °C 的加湿培养箱中，在 5% CO₂ 下孵育 15 分钟。
8. 去除含有非贴壁 OL 谱系细胞的上清液，并将其转移到 50 mL 试管中（50 mL 试管的上清液来自....

Materials