在细胞生产设施中处理神经干细胞培养

摘要

来源：Stover, A. E.，等. 在封闭式细胞培养系统中培养人多能干细胞和神经干细胞用于基础与临床前研究。J. Vis. Exp. (2016)。

该视频概述了在细胞培养工作站中维持受控环境以培养和维持神经干细胞的操作流程。这些操作包括设定培养室条件、清洁程序以及培养基的制备，从而实现最大程度的无菌性和可重复性，并取代传统方法。

方案

1. 初始设置

1. 设定气体和温度浓度
   1. 使用软件时，点击图形界面左上角的“Guest”标签。使用指定的用户名和密码登录系统。确保每位用户均有各自的用户名和密码。
   2. 单击模块进行调整（图1）。在显示当前设置的新窗口中，点击现有的 O₂ 在“设定点”下方设置点值，并输入此模块所需的 O₂ 浓度水平。输入 5% O₂₂ 如果多能干细胞将在本模块中进行培养或操作，且氧气浓度为9% O₂₂ 如果神经干细胞将被培养或操作，请点击绿色对勾以确认设定值。
      注意： 两个模块无法调节气体：层流罩和显微镜腔室。层流罩内的气体浓度为大气浓度，而操作腔室内的气体浓度则被动维持与显微镜腔室一致。
   3. 对 CO 重复此步骤₂设定5% CO的控制点₂ 除缓冲室外，所有模块均需调节，缓冲室仅调节 O₂.
   4. 监测标记为“过程值”的当前气体浓度，以确保其达到新的设定点。
   5. 调节所有模块的气体设定值至适当数值。匹配 CO₂ 和 O₂ 将相互连通的腔室调节至相同水平。例如，将工艺腔室调节至5% O₂₂ 在打开培养细胞的5....

结果

图1. 细胞生产设施的图形界面。（A）CPF的图形界面为默认屏幕，与图3所示的CAD图纸一致。鼠标点击缓冲模块1可打开其控制界面（B），其中O₂值被设定为与处理腔室一致。同样，点击处理腔室或培养箱1可分别调出其对应的控制界面（C和D），在其中可根据需要更改或监控相关参数。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Xvivo 系统	Biospherix	定制生产
Xvivo 软件	Biospherix	版本 i.o.2.1.2.1
O2 气体分配装置	Amico	P-M2H-C3-S-U-OXY
CO2 气体分配装置	Amico	M2H-C3-D-U-CO2
N2 气体分配装置	Western Innovator	CTM75-7-2-2-BM
O2 气体
CO2 气体
N2 气体
培养皿
水
无菌纱布
70% 乙醇	BDH	BDH1164-4LP
基于苯扎氯铵的消毒剂
杜氏磷酸盐缓冲液
基于 Hank's 液的细胞解离缓冲液	Life Technologies	13150-016
2 mL 血清移液管	VWR	89130-894
5 mL 血清移液管	Olympus Plastics	12-102
10 mL 血清移液管	Olympus Plastics	12-104
25 mL 血清移液管	Olympus Plastics	12-106
50 mL 血清移液管	Olympus Plastics	12-107
6 孔板	Corning	353046
20 µL 移液器吸头	Eppendorf	22491130
200 µL 移液器吸头	Eppendorf	22491148
1000 µL 移液器吸头	Eppendorf	22491156
配备 DP21 相机和荧光功能的显微镜	Olympus Corporation	CKX41
磷酸盐缓冲钠溶液	Hyclone	9236
二甲基亚砜	Protide	PP1130
手套