制备幼鼠脑的上丘-丘脑皮层切片

摘要

来源：Slater, B. J., 等，小鼠丘脑皮层脑片的改良，结合3D打印培养室组件与多尺度光学成像。J. Vis. Exp. (2015)

该视频展示了从小鼠幼崽脑组织制备上丘-丘脑-大脑皮层脑片的过程。将分离的脑组织置于带有标记的载片上并以特定角度切割，使听觉中脑与前脑处于同一平面。随后使用振动切片机对脑组织进行切片，并将包含主要听觉中脑和前脑结构的脑片转移至孵育室中保存。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 小鼠脑组织切片前的准备及脑组织取出

1. 准备灌注和脑片孵育。
   1. 在切片前约30分钟，配制高蔗糖切割液以及用于记录或成像前孵育脑片的低钙人工脑脊液（aCSF）。
   2. 准备好灌注和切片所需的所有工具（大号钝头剪刀、小弹簧剪刀、解剖镊、大剪刀或断头台、虹膜剪、珠宝商镊子、带27G × 1/2英寸针头的10 ml注射器、一小块1 cm × 2 cm的滤纸，以及尖端折断的巴斯德移液管用于转移脑片），并准备好灌注托盘。
   3. 将孵育 chamber 置于含氧aCSF中，并放入32 ^oC水浴中，同时准备一个装有切割液的培养皿。
2. 准备切片用的切片台。
   1. 切取一小块约1 cm³的3%琼脂作为脑组织的挡板，并切取一块1.5 cm × 1.5 mm × 3 mm的琼脂作为隆起物，用于支撑下丘（IC）。
   2. 使用氰基丙烯酸盐胶水将挡板固定在切片台上，并将隆起物粘在挡板右侧，使其与挡板形成80^o夹角。
3. 取出脑组织。
   1. 使用氯胺酮（100 mg/kg）和赛拉嗪（3 mg/kg）（或经伦理委员会批准的类似方案）对出生后....

结果

图1. 丘脑-丘脑皮层脑切片的黄素蛋白自体荧光成像。 (A) 通过黄素蛋白自体荧光确认的连接完整的上丘-丘脑-皮层脑切片。以0.05 Hz对下丘（IC）进行电刺激，以4 Hz成像并经傅里叶处理以显示刺激频率处的信号强度。注意内侧膝状体（MGB）、丘脑网状核（TRN）、听觉皮层（AC）以及纹状体（CS）均被激活。(B) 无连接的切片。对IC进行电刺激，仅观察到MGB被激活。整个通路可能未被完整保留，原因可能是17^o的角度略陡。(C) AC的非典型激活。对IC进行电刺激后，AC被激活，但在MGB或TRN中未见明显.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
高蔗糖切割液			以 mM 计：206 蔗糖，10.0 MgCl2，11.0 葡萄糖，1.25 NaH2PO4, 26 NaHCO₃3, 0.5 CaCl2，2.5 KCl，pH 7.4
低钙人工脑脊液			以 mM 计：126 NaCl，3.0 MgCl2，10.0 葡萄糖，1.25 NaH2PO4，26 NaHCO₃3，1.0 CaCl2，2.5 KCl，pH 7.4
aCSF			以 mM 计：126 NaCl，2.0 MgCl2，10.0 葡萄糖，1.25 NaH2PO4，26 NaHCO₃3，2.0 CaCl2，2.5 KCl，pH 7.4
DMSO	Life Technologies	D12345	批号：1572C502
大培养皿	Fisherbrand	08-757-13	100x15毫米培养皿
小型培养皿	Falcon	353001	35x10毫米培养皿
抬升式培养膜	Millicell	PICMORG50	用于维持切片两侧的含氧液体灌注。
用于脑组织封闭的琼脂糖			水中重量百分比为3%