通过短暂的DMSO处理增强干细胞分化

摘要

来源：Sambo, D. 等，使用DMSO短暂处理人多能干细胞以促进其分化。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了通过短暂的DMSO处理促进干细胞分化的实验方法，该处理可将细胞阻滞在G1期。处理后，加入含有BMP和TGF-β抑制剂的外胚层分化培养基，以促进神经前体细胞的形成。

方案

1. 干细胞维持

注意： 下文所述的细胞维持方案适用于以贴壁单层形式培养的多能干细胞（PSCs）。在二甲基亚砜（DMSO）处理前使用的培养基、其他试剂及细胞培养板可根据需要进行调整。本论文中所有后续实验方案均应在生物安全柜内操作处理细胞。

1. 根据制造商说明，使用适用于多能干细胞的基质或包被物对无菌的6孔组织培养板进行包被，并在CO₂ 培养箱（5% CO₂，湿润环境）中孵育至少1小时。包被后的培养板可用封口膜密封，于4 °C保存最多一周。
2. 在37 °C水浴中解冻冻存的PSCs。在将冻存管移入生物安全柜前，用乙醇进行表面消毒，随后立即用移液器将细胞转移至含有5–10倍体积预热干细胞培养基的无菌锥形管中。
3. 在室温（RT）下以300 x g 离心5分钟。
4. 吸除培养基，用1 mL添加了10 µM Rho相关蛋白激酶 （ROCK）抑制剂（如Y-27632）的干细胞培养基轻柔重悬细胞沉淀。
5. 从培养板中吸除包被基质，按所需密度接种细胞，通常每孔接种0.5–1 × 10⁶ 个细胞，每孔至少加入2 mL干细胞培养基。
   注意： 不同细胞系和克....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
6孔透明平底TC处理多孔细胞培养板	Corning	353046
Countess II FL 自动细胞计数仪	Thermo Fisher Scientific	AMQAF1000
DMEM/F-12	Gibco	11320033
DMSO	Sigma-Aldrich	D2650
Knockout DMEM	Gibco	10829018
Knockout 血清替代物	Gibco	10828028
Matrigel 基质	Corning	354277
Noggin Fc 嵌合蛋白	R&D Systems	3344-NG-050
SB431542	Stemgent	04-0010
超低吸附微孔板	Corning	3471
Y-27632	StemCell Technologies	72302