从小鼠海马组织获取单细胞悬液

摘要

来源：Trujillo, M.，等。小鼠脑海马组织的机械与酶解联合解离方法。J. Vis. Exp. (2021)

本视频演示了一种通过结合自动化的机械解离和多种酶混合物以辅助酶消化的方法，从小鼠脑海马区获得高活性单细胞悬液的实验方案。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过相应的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 为每个样品制备酶混合液1和2

注意：对于大于 2 mL 的体积，使用 10 mL 移液管；对于 200 µL–2 mL 的体积，使用 1000 µL 移液器；对于 21–199 µL 的体积，使用 200 µL 移液器；对于 2–20 µL 的体积，使用 20 µL 移液器；对于小于 2 µL 的体积，使用 0–2 µL 移液器。

1. 每个样本分别在室温下解冻一份酶P和一份酶A。
2. 配制酶混合液1：将50 µL酶P与1900 µL缓冲液Z加入已标记的C管中（材料表）。
3. 配制酶混合液2：将20 µL缓冲液Y加入已解冻的10 µL酶A中。

2. 成年小鼠脑组织解离方案

注意：处理样本时，除非另有说明，应将试管置于室温下的试管架中，而 BSA 和 D-PBS 应保持在冰上。

1. 打开组织解离仪。
2. 使用镊子将海马组织块转移至C管中。
3. 向C管中加入30....

结果

图 1：第 2.4 步中的已选状态

图 2：步骤 3.5 中的三层悬浮液：缓冲液（上层）、细胞碎片、去碎片溶液和细胞（下层）。

....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1.5 mL 微量离心管	Fisher Scientific	02-682-003	Basix，多种颜色
15 mL Falcon 管	Becton Dickinson Labware Europe	352009	聚苯乙烯
25 mL 血清移液管	Fisher Scientific	14-955-235
70 μm 细胞筛	Fisher Scientific	08-771-2
成年动物脑组织解离试剂盒	Miltenyi Biotec	130-107-677	包含酶P、缓冲液Z、缓冲液Y、酶A、缓冲液A、去碎片溶液
BSA	Sigma-Aldrich	A7906-50G
Falcon 50 mL 圆锥形离心管	Fisher Scientific	14-432-22
gentleMACS C 管	Miltenyi Biotec	130-093-237
带加热模块的 gentleMACS Octo 组织解离仪	Miltenyi Biotec	130-096-427
Gibco DPBS (1X)	ThermoFisher Scientific	14190144
玻璃烧杯	Fisher Scientific	02-555-25A
移液器吸头 GP LTS 20 µL 960A/10	Rainin	30389270
移液器吸头 GP LTS 250 µL 960A/10	Rainin	30389277
移液器吸头 RT LTS 1000 µL FL 768A/8	Rainin	30389213
Rainin Pipet-Lite XLS (2, 20, 200, 1000 μL)	Rainin	30386597
带盖圆形冰桶	Fisher Scientific	07-210-129
带细胞筛帽的圆底管	Falcon	100-0087