利用侧向柔光照射优化脑类器官培养的技术

摘要

来源：Chen, B. 等，通过侧向柔光照射促进脑类器官培养。J. Vis. Exp. (2022)。

本视频展示了利用侧向柔光照明技术增强类胚体的肉眼可视性，从而促进其在脑类器官培养过程中的操作与转移。视频详细说明了柔光照明系统的搭建、培养基更换和类胚体转移的方法，以及诱导类胚体神经分化的步骤，以实现脑类器官的发育。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 柔性光源灯的准备（第1天）

1. 使用厚度为 0.3–0.5 cm、尺寸为 A5 纸大小的透明亚克力板。在亚克力板的正反两面粘贴白色垫片。
2. 在板的边缘安装一排 LED 白光灯，使光线从亚克力板的侧面进入，然后平行射出（图 1A–F，图 2B）。
   注意： 由于早期 EBs 的直径约为 200 µm 至 300 µm，在超净台的荧光灯下肉眼难以清晰观察。相比之下，由于漫反射增强，使用侧向照射的柔光可清晰检测到 EBs（图 2B，C）。后续实验中建议使用 6 孔板进行 EB 培养。但为了更好地展示柔光的视觉效果，本研究中有时采用培养皿而非培养板来拍摄图片和视频，请勿误解。侧向照射的柔光灯同样适用于 6 孔板。

2. 胚胎团转移与培养基更换（第2-5天）

1. 准备一个新的6孔低吸附培养板，每孔加入2 mL拟胚体（embryoid body, EB）形成培养基。
2. 使用1000 µL宽口吸头（见材料表）将EBs连同培养基一同吸出，转移至6孔低吸附培养板中（约100个EB....

结果

图1：柔光灯的制备。（A）将电源和LED灯安装在亚克力板的一侧（如红虚线框所示）。LED柔光灯的散射波长为450–470 nm，光通量为1300–1800 lm，显色指数为75–85 Ra。（B）检查LED灯珠是否能正常点亮（如红虚线框所示）。（C）在亚克力板的前后两面粘贴白色垫片（如红色箭头所示）。（D）柔光灯的整体外观。（E）也可用市售无框LED绘图灯板替代该柔光灯，后者通常用于临摹草图时的描图。需在LED绘图灯板正上方直接粘贴一层白色薄膜。（F）柔.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.2 μm 滤膜	NEST Biotechnology, China	331001
1000 μL 宽口吸头	Thermo Fisher Scientific, USA	9405163
6 孔低吸附培养板	NEST Biotechnology, China	703011	用于拟胚体悬浮培养
离心机	Eppendorf, Germany	5810 R	可用于各种类型的离心管、试剂瓶和工作板的离心。
DMEM-F12	Thermo Fisher Scientific, USA	11330032
肝素	Merck, Germany	H3149
Glutamax 添加剂	Thermo Fisher Scientific, USA	35050061
Glutamax 添加剂	Thermo Fisher Scientific, USA	17504044
MEM-NEAA	Thermo Fisher Scientific, USA	11140050
N2 添加剂	Thermo Fisher Scientific, USA	17502048
柔光灯	NUT	NUT	一种简易自制装置，制备方法参见补充图 2。