分析培养的果蝇脑外植体中神经干细胞的再激活

本文内容

摘要

来源：Naomi Keliinui, C.，等。培养的果蝇脑外植体中神经干细胞的再激活。视觉化实验杂志（2022年）。

本视频演示了一种鉴定外源因子启动果蝇（Drosophila）脑神经干细胞从静息状态重新活化的实验方案。通过解剖刚孵化的幼虫以分离其大脑组织，随后将脑组织置于含有或不含待测激素的培养基中进行培养，以评估该激素是否具有诱导神经干细胞重新活化和增殖的潜力。

方案

1. 培养基和工具的准备

用70%乙醇喷洒实验台和工作区域，并静置晾干。
用70%乙醇喷洒解剖工具、镊子以及两个玻璃培养皿，并将其放置在实验台上晾干。
配制添加物的Schneider培养基（SSM，表1），并置于冰上。
用移液器将1 mL SSM加入每个玻璃培养皿中。
使用带无菌吸头的微量移液器，将新孵化的幼虫从PBS培养皿转移至第一个玻璃培养皿中的SSM中；再使用带无菌吸头的微量移液器，将新孵化的幼虫转移至第二个玻璃培养皿中的SSM中。

2. 解剖与脑组织培养

当幼虫转移至第二个含有SSM的玻璃培养皿后，使用镊子和解剖显微镜将脑组织从幼虫体内解剖出来。根据需要调整放大倍数。
用一把镊子夹住口钩，另一把镊子轻轻夹住幼虫身体中段，向相反方向拉动（图1），使幼虫断裂为两部分。
注意：脑组织位于口钩正后方。注意脑周围可能附着其他组织。去除这些组织时需格外小心，以免损伤脑组织。
解剖获得15–20个脑组织后，向无菌12孔细胞培养板的一个孔中加入1 mL SSM。使用移液器和无菌吸头将新鲜解剖的脑组织转移至SSM中（图2A）。
将含有脑组织的12孔培养板置于25 °C培养箱中孵育24小时（图2A）。

表1：配制补充型Schneider培养基（SSM）的配方。该表格列出了配制5 mL SSM所需各成分的体积。

成分（起始浓度）	配制 5 mL	终浓度
Schneider's Drosophila 培养基	3.89 mL
胎牛血清（100%）	500 µL<	10%
谷氨酰胺（200 mM）	500 µL	20 mM
青霉素（5000 单位/mL），链霉素（50,000 µg/mL）	100 µL	1000 U/mL 青霉素，1 mg/mL 链霉素
胰岛素（10 mg/mL）	10 µL	0.02 mg/mL
谷胱甘肽（50 mg/mL）	5 µL	0.05 mg/mL
在超净工作台中，采用无菌操作技术，将所有成分加入一个 14 mL 的锥形管中。配制后置于冰上，待用。

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结果

幼虫解剖示意图，突出显示口钩和脑部，用于解剖学研究。
图1：置于玻璃培养皿中的含SSM的黑腹果蝇（Drosophila）幼虫。镊子已正确放置以进行解剖。幼虫脑部（深灰色）位于口钩（黑色）后方，图中显示二者均位于幼虫体内。

脑组织制备与孵育示意图；多孔板、移液器、孵育24小时。
图2: 脑组织培养与免疫染色。（A）...

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材料

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