从小鼠坐骨神经中磁分离雪旺细胞

摘要

来源：Blusch, A.，等，大鼠背根神经节外植体与施万细胞共培养体系中周围神经轴突的体外髓鞘形成。J. Vis. Exp. (2023)

本视频展示了一种从小鼠坐骨神经纤维中分离施万细胞的方法。

方案

1. 施万细胞培养

1. 雪旺细胞培养包被
   1. 在无菌条件下对细胞培养皿进行包被。向两个60 mm的组织培养（TC）皿中各加入2 mL的0.01%多聚赖氨酸（PLL），于4 °C孵育过夜。
   2. 移除PLL，用去离子水洗涤TC皿2次，然后加入2 mL浓度为1 µg/cm²的层粘连蛋白，于4 °C孵育过夜。再用去离子水洗涤TC皿2次，让培养皿自然风干。
2. 雪旺细胞培养基的配制
   1. 在无菌条件下，向50 mL的Dulbecco′s改良Eagle′s培养基（DMEM）/F-12（高糖）中加入10%热灭活胎牛血清（FCS）、2 µM佛司可林（forskolin）、10 nM神经调节蛋白（neuregulin）和50 µg/mL庆大霉素，配制成雪旺细胞培养基。
   2. 在无菌条件下，向70 mL Leibovitz's L-15培养基中加入50 µg/mL庆大霉素。
3. 坐骨神经的酶消化
   ​注意：以下步骤均在无菌条件下操作。
   1. 在10 mL DMEM（高糖）中配制含0.25% dispase II、0.05% I型胶原酶和50 µg/mL庆大霉素的酶消化液。
   2. 在4 °C下以188 x g离心....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
牛血清白蛋白	Carl Roth, Karlsruhe, Germany	8076.4
细胞筛，100 µM	BD Bioscience, Heidelberg, Germany	352360
离心机 5810-R	Eppendorf AG, Hamburg, Germany	5811000015
CO2 培养箱 Heracell	Heraeus Instruments, Hanau, Germany	51017865
Dispase II	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germany	4942078001
蒸馏水（纯水系统）	Millipore, Molsheim, France	ZLXS5010Y
DMEM/F-12，含 GlutaMAX	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germany	31331093
DPBS（不含钙离子和镁离子）	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germany	D8537-6X500ML
FCS	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germany	F7524	FCS 必须经过雪旺细胞培养测试
庆大霉素	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germany	5710064
HBSS（不含钙离子和镁离子）	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germany	14170138
层粘连蛋白	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germany	L2020-1MG
MACS 多功能支架	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany	130042303
显微剪刀	Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germany	15000-08
显微镜	Motic, Wetzlar, Germany	Motic BA 400
载玻片	VWR, Radnor, USA	630-1985
MiniMACS 分离器	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany	130091632
MS 柱	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany	130-042-201
Neubauer 计数板	Assistant, Erlangen, Germany	40441
移液器	Eppendorf AG, Hamburg, Germany	2231300004
聚-L-赖氨酸	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germany	P4707-50ML
血清移液管，10 mL	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	861254025
血清移液管，25 mL	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	861685001
血清移液管，5 mL	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	861253001
TC 培养皿 60，细胞+	Sarstedt, Nümbrecht, Germany	833901300
Thy-1 磁珠（MACS 试剂盒）	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany	130-094-523
胰蛋白酶-EDTA（0.05%），含酚红	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germany	25300-054
I 型胶原酶	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germany	C1639
水浴锅 1008 型	GFL, Burgwedel, Germany	4285