生成冠状脑切片，暴露小鼠大脑的杏仁核区域

摘要

来源:Bosch， D. 等人。脑切片中恐惧回路的体外光遗传学解剖。J. Vis. Exp. （2016 年）。

该视频演示了从小鼠大脑制备薄冠状脑切片的过程，暴露了来自内侧前额叶皮层的富含突触连接的杏仁核区域。然后将切片回收到含氧人工脑脊液中，以维持神经元活力。

方案

1. 急性切片的制备

1. 准备 ACSF、切割溶液、工具（剪刀、手术刀、镊子、抹刀、巴斯德移液管）和琼脂块><。 注意:每个实验需要 1 L 人工脑脊液 （ACSF）。如前所述，ACSF 是通过将化学品溶解在双蒸 H 2 O 中来制备的。通过在 200 ml ACSF 中补充 0.87 ml 2 M MgSO₄ 储备溶液来制备切割溶液。
2. 在整个实验过程中，用 95% O₂ 和 5% CO₂ 对 ACSF 和切割溶液充氧。
3. 使用小型动物麻醉机，使用异氟醚（3% 氧气）对小鼠进行深度麻醉。在继续之前，使用肢体撤退反射检查麻醉深度。
4. 用大剪刀将鼠标斩首，并立即在冰冷的切割溶液中冷却头部。
5. 通过从尾部到嘴部的单个中线切口打开颅骨，然后使用镊子轻轻地将颅骨碎片推向两侧。使用小圆铲轻轻地将大脑从颅骨中提起，快速取出大脑。用手术刀切开小脑。将大脑放入冰冷的切割溶液中。
6. 对于 mPFC 注射部位，用手术刀切掉大脑的前部（含有 mPFC），并将其放入冰冷的切割溶液中直至切片。
7. 用滤纸去除多余的切割溶液，并将大脑的后部粘在振动切片机平台上。
8. 对于冠状杏仁核切片、MGm/PIN 注射部位和 mPFC 注射部位，将大脑直接粘在载物台上（图 1D，左和右）。在大脑后面放置一个额外的琼脂块，以便在切片时保持稳定。
9. 将载物台放入切割室中，使用冷却装置将冰冷的含氧切割溶液保持在 4 °C。使用蓝宝石刀片，准备杏仁核的冠状切片。将切片放入室温下提供含氧 ACSF 的界面室中。

结果

图 1.立体定向注射、急性脑切片的制备和突触前纤维的可视化。（一、二）立体定向病毒注射。A） 将麻醉小鼠放置在立体定向框架中，颅骨暴露且注射移液管的照片。插图:放大填充病毒溶液与固绿混合的注射移液管的图片。比例尺:3 毫米。（B） 小鼠头骨的示意图，其中标记了不同注射区域的钻孔位置。（C） 显示本研究中使用的不同病毒构建体的方案。深灰色:启动子序列;蓝色:通道视紫红质 2 （ChR2 （H134R））;绿色/红色:荧光蛋白。局部杏仁核投影的表达时间为 2 周，mPFC 和 MGm/PIN 投影的表达时间为 4 - 6 周。（D） 急性脑切片的制备:显示小鼠大脑放置在切片机阶段的方案，用于从不同的注射和投影区域获得切片。（E） 在 MGm/...

材料