通过荧光激活细胞分选法从秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中分离神经元

摘要

来源：Germany, E. M.，等。从线虫Caenorhabditis elegans中分离特定神经元群体。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了从秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中分离荧光标记神经元的方法。通过转基因线虫制备细胞悬液，这些线虫的胆碱能神经元中表达有荧光蛋白融合的囊泡跨膜转运蛋白。随后利用荧光激活细胞分选（FACS）分离出荧光标记的神经元，并进行体外培养。

方案

1. 用于细胞分离的衰老线虫的准备与收集

1. 收集线虫并制备细胞分离用缓冲液。
   1. 收集线虫至15 mL锥形管中，用1.5 mL M9缓冲液（1 mM MgSO₄）从平板上冲洗线虫₄，85 mM NaCl，42 mM Na₂HPO₄·7H₂O, 22 mM KH₂PO₄，pH 7.0）中，1,600 × g 离心 5 分钟 g弃去上清液，用1 mL M9缓冲液洗涤线虫。重复离心和洗涤，共进行五次，以尽可能去除 大肠杆菌 尽可能减少污染。
      ​注意： 在此步骤中加入抗生素（如氨苄青霉素，50 µg/mL）有助于减少细菌污染。
   2. 对于两个样品，配制 2 mL 十二烷基硫酸钠-二硫苏糖醇（SDS-DTT）裂解缓冲液：含 200 mM DTT、0.25% (w/v) SDS、20 mM HEPES（4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸）（pH 8.0）和 3% (w/v) 蔗糖。
   3. 配制 15 mL 分离缓冲液（118 mM NaCl, 48 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 10 mM HEPES, 5 mM 葡萄糖，pH 7.4）₂，2 mM ....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
6 孔板	Fisher Scientific	12-556-004
琼脂，分子生物学级	VWR	A0930
CaCl2	Sigma	C5670
Contess 自动细胞计数仪	Invitrogen	Z359629
DTT	USBiological	D8070
FBS	Omega Scientific	FB-02
HEPES	Sigma	H3375
KCl	Amresco	O395
KH2PO4	USBiological	P5110
Kimwipes 纸巾	Kimberly-Clark Professionals	7552
Leibovitz's L-15 培养基	Gibco	21083027
MgCl2	Sigma	M8266
MgSO4	USBiological	M2090
Na2HPO4·7H2O	USBiological	S5199
NaCl	VWR	X190
NaOCl（漂白剂）	Clorox
NaOH	Amresco	O583
青霉素-链霉素	Fisher Scientific	15140122
蛋白胨 Y	USBiological	P3306
Pronase E	Sigma	7433	来自灰色链霉菌的蛋白酶混合物
SDS	Amresco	O227
SMT1-FLQC 荧光体视显微镜	Tritech Research
蔗糖	USBiological	S8010