在多电极阵列上分离和培养雏鸡胚胎神经元

摘要

>来源:Sanchez， K. R.， et al.， 使用多电极阵列评估内分泌干扰化合物对脊椎动物神经网络功能开发的影响。 （2018 年）

该视频演示了一种从早期雏鸡胚胎的前脑中分离神经元并在微电极阵列上培养它们以形成神经元网络的方法。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 材质设置

1. 在 37 °C 的市售桌面鸡蛋培养箱中孵化雏鸡蛋。E7 胚胎的鸡蛋孵化 7 天。
2. 准备多电极阵列 （MEA）。通过将所需数量的 MEA 浸泡在 70% 乙醇中 3 至 4 小时，然后在生物安全二级 （BSLII） 罩中用大约 10 mL 无菌蒸馏水冲洗 3 次来消毒所需数量的 ME>注意:MEA 包含 64 个纳米多孔铂电极，以 8 x 8 的网格排列。电极直径为 30 μm，电极间距为 200 μm。请勿使用变性乙醇对 MEA 进行消毒，因为这会导致腐蚀。
3. 将 MEA 放入带盖的无菌容器中（以保持无菌条件），然后移至台式培养箱中。在 55 °C 下烘烤至少 6 小时。此步骤对于正确灭菌至关重要，温度不应超过 60 °C。为了保持无菌，将含有 MEA 的培养皿移至 BSLII 通风橱中储存，直到进一步使用><。 注意: 我们使用带塑料盖的烤箱安全玻璃烤盘，用 70% 乙醇对其进行表面消毒，然后将其放入 BSLII 通风橱中干燥。
4. 分装细胞外基质 （ECM） 溶液。将样品瓶在 4 °C 下解冻过夜，并在 -20 °C 下冷冻 100 μL 等分试样><。 注意:

结果

图 1:描述从解剖雏鸡前脑到解离、电镀和记录网络活动的步骤的方案示意图。

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材料