小鼠脑内侧丘脑-前扣带皮层切片的制备

摘要

来源：Lu, H.，等。小鼠脑片制备中癫痫样活动的直流刺激与多电极阵列记录。J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了小鼠脑内内侧丘脑-前扣带皮层（MT-ACC）脑片的制备过程。从小鼠脑中分离脑组织，进行切割以暴露MT-ACC通路，并使用振动切片机制备脑片。随后将MT-ACC脑片置于充氧的人工脑脊液中维持存活。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 脑切片制备

1. 使用4-8周龄的雄性C57BL/6J小鼠。将动物饲养在空调房间内（21-23 °C；50%湿度；12小时光照/12小时黑暗循环，光照开启时间为上午8:00），自由获取食物和水。
2. 取250 ml 人工脑脊液（aCSF）分装至烧杯中，并将烧杯置于冰上。同时，持续通入由95% O₂ 和5% CO₂组成的混合气体。
3. 手术
   1. 在玻璃罩中使用4%异氟烷对动物进行麻醉，持续约3分钟。当动物达到手术深度麻醉状态（表现为对脚趾夹捏无反应）时，将其置于装有碎冰的浅盘上，并用剪刀去除头部。
   2. 暴露颅骨，并剪除残留的肌肉组织。接着使用咬骨钳剥离脑部背侧的颅骨表面，再用咬骨钳修剪颅骨两侧。所有手术器械均用75%乙醇溶液进行消毒。
   3. 使用解剖刀沿脑腹侧切断嗅球及神经连接，并取出脑组织。断头后，迅速将脑组织转移至盛有冰冻含氧aCSF的烧杯中。
4. 内侧丘脑（MT）-前扣带皮层（ACC）脑切片的制备
   注意：制备包含从MT至ACC通路的脑切片。
   1. 用手持刀片对脑组织块进行两次矢状切，切面位于中线两侧各2.0 mm处，以暴露皮层下解剖结构。然后进行两次斜切：第一次横切平行于纹状体中可见的纤维束。
   2. 第二次横切从小脑与视觉皮层之间的连接处，延伸至前连合与视束之间腹侧的中点，该切面应与丘脑-扣带回通路平行。
   3. 使用氰基丙烯酸盐胶将脑组织块固定于角度约为120°的斜板上，并在通路转折点上方进行一次切片。展开斜板并将其展平，然后粘附至振动切片机的切片室载物台上。
   4. 制备内侧丘脑-ACC脑切片（厚度为500 µm），随后将其浸入冰冻含氧aCSF中。将切片转移至记录室，在持续灌流（12 ml/min）含氧aCSF条件下，于32 °C孵育1小时。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
麻醉剂：
异氟烷	Halocarbon Products Corporation	NDC 12164-002-25	4%
aCSF（总量：1L）：
D(+)-葡萄糖	MERCK	1.08337.1000	10 mM
碳酸氢钠	MERCK	1.06329.0500	25 mM
氯化钠	MERCK	1.06404.1000	124 mM
(+)-L-抗坏血酸钠，>=98%	SIGMA	A4034-100G	0.15 g / 2 c.c
无水硫酸镁，ReagentPlus	SIGMA	M7506-500G	2 mM
二水氯化钙	MERCK	1.02382.1000	2 mM
一水磷酸二氢钠	MERCK	1.06346.1000	1 mM
氯化钾	May & Baker LTD Dagenham England	MS 7616	4.4 mM