从小鼠胚胎背外侧端脑中分离与培养细胞

摘要

来源：Landeira, B. S.，等。利用二维培养系统对大脑皮层原代细胞进行活体成像。J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了一种从小鼠胚胎端脑背外侧区域分离和培养原代大脑皮层细胞的实验方案。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 动物医学评审委员会的审核。

1. 背外侧端脑显微解剖

1. 准备解剖液（100 mL）：98.5 mL 的 Hank's 平衡盐溶液（HBSS），0.5 mL 的 5 M 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸（HEPES）pH 7.4，1 mL 青霉素/链霉素（10,000 单位/mL 和 10,000 µg/mL）。
2. 对解剖液进行滤膜除菌。
3. 在异氟烷麻醉下，从怀孕的 C57/Bl6 小鼠（Mus musculus）中取出胚胎发育第14天（E14）的胚胎。
   注意：以检测到阴道栓的当天为 E0。从怀孕小鼠体内取出胚胎后，解剖操作应在 1 小时内完成。本方案同样适用于 E11 至 E17 的胚胎。
4. 在无菌条件下通过子宫切除术取出胚胎。
5. 将胚胎转移至含有冷解剖液（4 °C）的培养皿中。
6. 沿大脑纵裂剪开，从颅骨中取出脑组织。通常每次实验可获得 5 至 10 个胚胎。每个 E14 胚胎脑组织可获得约 2 × 10⁶ 个细胞，包括前体细胞和终末分裂后神经元（比例约为 1:1）。
   注意：后续步骤请使用体视显微镜....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Hank's 平衡盐溶液 (HBSS)	Invitrogen Life Technologies	14175129
HEPES	Sigma-Aldrich	H3375-25G
青霉素/链霉素	Gibco	15140122
杜尔贝科改良伊格尔培养基 (DMEM)	Gibco	12400-024
胎牛血清 (FCS)	Gibco	10437028
葡萄糖	Gibco	A2494001
B27	Gibco	17504044
胰蛋白酶-EDTA (0.05%)	Gibco	25300054
细胞观察显微镜	Zeiss