来源：Valente, C. A., 等., 内嗅皮层-海马体脑片培养中的癫痫发生模型。J. Vis. Exp. (2021)
该视频展示了一种从幼鼠大脑中获取嗅周皮层-海马切片，并将其培养在含培养基的多孔板膜插件中的方法，以用于后续分析。
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方法文章
制备大鼠幼鼠脑的鼻周皮层-海马切片
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物样本的实验程序均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。
1. 鼻周皮层-海马切片的制备
注意：内嗅皮层-海马切片的制备使用P6-7天的Sprague-Dawley大鼠。
- 培养设置与培养基制备
- 在培养前一天，准备好所需的培养基，并将其置于 4 °C 保存。
- 制备解剖用培养基：在 Gey's 平衡盐溶液（GBSS）中加入 25 mM 葡萄糖。
- 制备培养用培养基：50% Opti-MEM、25% HBSS、25% 马血清（HS）、25 mM 葡萄糖、30 µg/mL 庆大霉素。
- 制备维持培养基：Neurobasal-A（NBA）、2% B27、1 mM L-谷氨酰胺、30 µg/mL 庆大霉素，以及不同浓度的马血清（15%、10%、5% 和 0%）。
- 脑组织获取
- 在开始培养前，使用 P1000 移液器向 6 孔板的每个孔中加入 1.1 mL 培养基，并将其置于 37 °C 环境中。
- 将所有设备（解剖显微镜、组织切片机、解剖灯、解剖工具、电极、培养板、插入式培养插件和滤纸）放入生物安全柜中，并在紫外线下灭菌 15 分钟。
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结果
图 1：鼻周皮层-海马体器官型脑片制备的详细步骤。 （A）从头部取出脑组织，将其置于冰上预冷的GBSS中，背侧朝上。（B）将镊子插入小脑部位，沿中线打开脑组织，并去除海马体上方多余的组织。（C）用解剖刀在海马体下方进行切割，如箭头所示。（D）将两个海马体并列、腹面朝上放置于滤纸上，使用组织切片机切割成350 µm厚的切片。（E）将切好的海马体组织置于冰上预冷的GBSS中。（F）借助圆头玻璃电极分离各脑片。（G）仅选取显示完.......
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 手术刀柄用刀片 | Fine Science Tools | 10011-00 | |
| 脑组织/组织切片孵育系统 | Warner Instruments | ||
| 细胞培养插件，30 mm，亲水性聚四氟乙烯（PTFE） | Millipore SAS | PICM03050 | |
| 常规培养箱 | Thermo Scientific Heraeus | BB15, Function Line | 设定为 37 °C 和 5% CO2 |
| D-(+)-葡萄糖一水合物 | Merck Millipore | 1.08342.1000 | |
| D-(+)-葡萄糖溶液，45% 水溶液 | Sigma | G8769 | |
| 二水合磷酸氢二钠 | Merck Milipore | 1.06580.1000 | |
| Dumont #5 生物学级精细镊子，不锈钢 | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Dumont #5 标准镊子，不锈钢 | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Dumont #7 标准镊子，Dumoxel 材质 | Fine Science Tools | 11271-30 | |
| Dumont 医用 #7S 镊子，短弯头，不锈钢 | Fine Science Tools | 11273-22 | |
| 庆大霉素储备液，50 mg/mL | Thermo Fisher Scientific | 15750-037 | |
| Gey's 平衡盐溶液（GBSS） | Biological Industries | 01-919-1A | |
| 玻璃电极 | Science Products | GB150F-10 | 圆头，自制 |
| 巴斯德玻璃吸管，230 mm | VWR International | 612-1702 | |
| 马血清，热灭活（HS） | Thermo Fisher Scientific | 26050-088 | |
| 弯头虹膜刮匙 | Fine Science Tools | 10092-12 | |
| Labculture II 级生物安全柜 | HERASafe | HS 12 | |
| L-谷氨酰胺溶液 200 mM（Q） | Thermo Fisher Scientific | 25030-024 | |
| Neurobasal-A 培养基（NBA） | Thermo Fisher Scientific | 10888-022 | |
| Opti-MEM® I 低血清培养基 | Thermo Fisher Scientific | 31985-047 | |
| 铂金 5 刃刀片 | Gillette | ||
| 定性滤纸，纤维素，1 号，55 mm | Whatman | 1001-055 | 中等保留能力，11 µm |
| 定性滤纸，纤维素，1 号，90 mm | Whatman | 1001-090 | 中等保留能力，11 µm |
| 手术刀柄 | Fine Science Tools | 91003-12 | |
| 经组织培养处理的无菌 6 孔板 | Corning | CORN3516 | |
| 温度控制器 | MEDICAL SYSTEMS CORP. | TC-102 | |
| 组织切片机 | The Mickle Laboratory Engineering CO. LTD. | MTC/2 | 设定为 350 μm |
