来源：Er, S.，等。在原代胚胎小鼠中脑多巴胺能神经元中研究预先形成的纤维诱导的α-突触核蛋白聚集。J. Vis. Exp. (2020)。
该视频展示了从小鼠胚胎中脑分离和培养多巴胺能神经元的过程。分离出的腹侧中脑组织通过酶消化法进行解离。获得的多巴胺能神经元被收集并转移至多孔板内的微岛结构中。细胞在多巴胺能神经元培养基中孵育，以维持其在微岛内的高密度生长状态。
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方法文章
原代小鼠中脑多巴胺能神经元的分离与培养
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。
1. 准备
- 使用 0.46% D-葡萄糖、1% L-谷氨酰胺、1% N2、0.2% 原霉素（primocin）配制多巴胺能神经元培养基（DPM），并以杜尔贝科改良伊格尔培养基/营养混合物 F-12（DMEM/F12）补足。混合后过滤 DPM。将 DPM 储存于 4 °C，每份仅限预热一次。
注意：DPM 中不应含有胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF），因其会减少多巴胺能神经元中 α-突触核蛋白的积聚。 - 准备经硅化处理的玻璃移液管，其表面极度疏水，从而在胚胎神经元初始操作过程中最大限度减少细胞黏附于管壁及细胞损失。
- 将 10 mL 硅化液加入 1 L 蒸馏水中，在 2 L 容器中搅拌混合。将玻璃移液管浸入硅化液中 15 分钟。
- 用蒸馏水冲洗移液管 3–5 次。在室温下过夜自然晾干，或在 100–120 °C 的加热无菌空间中干燥 1–2 小时以加快干燥过程。
- 将移液管装入密封的高压灭菌袋中，通过标准高压灭菌法进行灭菌。
- 准备经多聚-L-鸟氨酸（PO）包被的 96 孔板（透明底），向将用于接种神经元的孔中央加入 60 μL PO 溶液，板边缘至少留出一整行或一整列孔不加，以避免边缘效应。....
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结果
图1：E13.5小鼠胚胎中脑腹侧板的解剖。（A）头部后部的切割位置以黑色箭头和白色虚线标出。（B）该组织块已从胚胎其余部分分离。被移除的组织块以圆圈标出。（C）将组织块旋转90°，使后端朝向观察者。（D）从黑色箭头处沿尾侧至头侧方向（白色虚线标示）打开组织。（E）在开口下方0.5 mm–1 mm处，切取2 mm2–4 mm2的区域（黑色线条标示）。（F）分离出中脑腹侧板（黑色虚线方框标示）。比例尺 = 1 mm。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 0.4% 台盼蓝染液 | Gibco，Thermo Scientific，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆 | 15250061 | |
| 15 ml CELLSTAR 聚丙烯管 | Greiner Bio-One GmbH，德国弗里肯豪森 | 188261 | |
| 4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI） | Sigma-Aldrich，美国密苏里州圣路易斯 | 10236276001 | |
| 5 M HCl | N/A | N/A | 赫尔辛基大学生物技术研究所媒体厨房 |
| 5 M NaOH | N/A | N/A | 赫尔辛基大学生物技术研究所媒体厨房 |
| 96孔视图板（黑色） | PerkinElmer，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆 | 6005182 | |
| 99.5% 乙醇（EtOH） | Altia Oyj，芬兰拉贾迈基 | N/A | |
| AquaSil 硅化液 | 美国马萨诸塞州沃尔瑟姆赛默飞世尔科技公司 | TS-42799 | |
| 经高压灭菌的1.5 ml 微型离心管 | N/A | N/A | 媒体厨房，赫尔辛基大学生物技术研究所 |
| Bioruptor 超声破碎仪 | 比利时列日 Diagenode | B01020001 | |
| Ca2+，Mg2+ 无钙镁亨克氏平衡盐溶液（HBSS） | Gibco，Thermo Scientific，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆 | 14175-053 | |
| CellProfiler 和 CellAnalyst 软件包 | N/A | N/A | 免费开源软件 |
| 离心机 5702 | Eppendorf AG，德国汉堡 | 5702000019 | |
| CO2 培养箱 | HeraCell，Thermo Scientific，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆 | N/A | |
| 计数室 | BioRad公司，美国加利福尼亚州赫拉克勒斯 | 1450015 | |
| DeltaVision 超高分辨率显微镜，配备气浮台与机柜 | 美国马萨诸塞州波士顿，GE医疗集团生命科学部 | 29254706 | |
| 脱氧核糖核酸酶-I（Dnase I） | 罗氏公司，巴塞尔，瑞士 | 22098700 | |
| DMEM/F12 | Gibco，Thermo Scientific，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆 | 21331–020 | |
| 杜氏缓冲液 | N/A | N/A | 媒体配制室，赫尔辛基大学生物技术研究所 |
| 胎牛血清（FBS） | Gibco，Thermo Scientific，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆 | 10500056 | |
| D-葡萄糖 | Sigma-Aldrich，美国密苏里州圣路易斯 | G8769 | |
| 磷酸盐缓冲液（PBS） | N/A | N/A | 赫尔辛基大学生物技术研究所媒体厨房 |
| Primocin | 美国加利福尼亚州圣地亚哥，InvivoGen | ant-pm-1, ant-pm-2 | |
| 聚-L-鸟氨酸 | Sigma-Aldrich，美国密苏里州圣路易斯 | P4957 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich，美国密苏里州圣路易斯 | 11332481001 | |
| 胰蛋白酶 | MP Biomedicals，Valiant 公司，中国山东烟台 | 2199700 |
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