果蝇幼虫脑组织外植体的解剖与封片

摘要

来源：Sheng, C., 等 延时活体成像与发育过程中快速树突分支动态的量化分析 果蝇 神经元。 视觉实验杂志. (2019).

本视频展示了从黑腹果蝇（Drosophila）幼虫中解剖并制备脑外植体的过程。从中枢神经系统（CNS）连同眼原基一起从幼虫体内取出后，置于生理盐水中，并在载玻片上进行固定。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 解剖与制备幼虫脑外植体

1. 在解剖显微镜（4.5倍放大倍数）下，使用两把#5标准尖头解剖镊（11 cm），于生理外液（120 mM NaCl、4 mM MgCl₂、3 mM KCl、10 mM NaHCO₃、10 mM葡萄糖、10 mM蔗糖、5 mM N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸（TES）、10 mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸（HEPES）、2 mM Ca²⁺，pH 7.2）中解剖幼虫脑组织。用一把镊子固定幼虫身体，另一把小心分离出脑组织。保留眼盘、脑叶和腹神经索。去除附着的肌肉，以减少成像过程中的样本移动。
2. 准备一张载玻片（25 × 75 × 1.0 mm³），并用注射器在载玻片上以真空脂绘制一个方形腔室。
3. 向带有脂质屏障的方形腔室内加入20 µL外液。
4. 用镊子将解剖好的幼虫脑组织转移至载玻片的腔室内。在解剖镜下调整脑组织位置，确保背侧朝上。
5. 用盖玻片（22 × 22 × 0.15 mm³）覆盖腔室。此时幼虫脑组织已固定在充满外液的腔室内（图1B）。
   注意：....

结果

图1：树突动态成像与定量分析流程图。（A）该流程包含六个步骤，涵盖样本制备、图像采集、图像处理以及树突动态的半自动化定量分析。（B）示意图展示了一个成像腔室，其中放置了腹侧朝上的幼虫脑组织离体样本。每个脑半球中均有一个单独标记的腹外侧神经元（LNv），并浸没在外部生理盐水中。真空脂屏障支撑着盖玻片的重量，并形成一个小型腔室，防止脑组织移动。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
高真空润滑脂	Dow Corning	79751-30
显微镜盖玻片	Fisher Scientific	12-544-E
Superfrost Plus 显微镜载玻片	Fisher Scientific	12-550-15
试剂
葡萄糖
HEPES
KCl
MgCl2
NaCl
NaHCO3
PBS
蔗糖
TES