小鼠大脑双半球局部场电位的记录

摘要

来源：Chen, Y., 等 小鼠次级运动皮层双侧局部场电位记录评估半球偏侧化。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频演示了从小鼠大脑双侧M2区域进行局部场电位（LFP）的in vivo记录。将麻醉后的小鼠固定并进行手术准备。为记录LFP，需将微电极插入双侧M2区域的目标坐标位置，该区域负责复杂的运动行为。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 动物麻醉与手术

1. 根据当地动物护理委员会批准的麻醉方案，称重并麻醉小鼠。
2. 使用镊子进行尾部或脚趾夹捏，以确认手术前已达到深度麻醉状态。
3. 将小鼠置于立体定位仪中，并固定其头部。
4. 在双眼上涂抹眼膏以保持湿润。遵循当地动物护理指南中关于术前和术后镇痛的规定。
5. 使用手术剪刀剃除手术区域的毛发。在暴露的手术区域中央做一个12–15 mm的小切口。用镊子轻轻将头皮从正中线拉开。
6. 轻柔分离皮肤并清除残留组织。使用蘸有双氧水的棉签清洁颅骨表面。
7. 在颅骨左右两侧各钻一个半径为1.0–1.5 mm的小孔，以便在体视显微镜下将记录微电极插入M2区域（图1A）。
   注意：双侧M2的立体定位坐标：前囟前1.94 mm，正中线外侧1.0 mm，硬脑膜下0.8–1.1 mm。
8. 用钨针小心去除硬脑膜。
9. 将玻璃硼硅酸盐微量移液管（外径：1.0 mm）拉制成记录微电极，使其电阻为1–2 MΩ。
10. 使用机械微操纵器，将两根分别充满0.5 M NaCl的记录微电极以60°角插入小孔中（图1B）。

2. 小鼠双侧M2的LFP记录

1. 将左右玻璃电极缓慢插入双侧M2的相应坐标位置（图1C）。
2. 为进行质量控制，在采集局部场电位（LFP）之前，使用差分放大器检测每个电极的阻抗。
3. 设置记录参数为0.1 Hz高通滤波、1,000 Hz低通滤波，并以1,000倍放大。
4. 在小鼠麻醉状态下以每秒2次呼吸的均匀呼吸频率保持稳定后，采集至少60秒的自发活动数字化原始LFP数据。
5. 记录结束后，缓慢将电极从脑组织中提起，随后通过快速颈椎脱臼法处死小鼠。
6. 保存数据并进行离线分析。

结果

图 1： 同步局部场电位（LFP）记录操作示意图。（A）暴露颅骨并去除硬脑膜的小鼠立体定位装置，用于双侧大脑M2区在体LFP同步记录。（B）两根玻璃微电极同时接触钻孔处皮层表面。（C）记录用微电极及作为参考电极的Ag/AgCl导线置于适当位置。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
交流/直流差分放大器	A-M Systems	Model 3000
模数转换器	Cambridge Electronic Design Ltd.	Micro1401
玻璃硼硅酸盐微量移液管	南京舜耕实验设备有限公司	161230	外径：1.0 mm
微电极拉制仪	Narishige	PC-10
NaCl	广州化学试剂厂	7647-14-5
针式微电极夹持器	World Precision Instruments, INC.	MEH3SW10
Spike2	Cambridge Electronic Design Ltd.
体视显微镜	Zeiss	435064-9020-000
立体定位仪	RWD Life Science	68045
氨基甲酸乙酯	Sigma-Aldrich	94300