建立胶质母细胞瘤大鼠模型

摘要

来源：Bolcaen, J.，等，利用微型辐照仪对胶质母细胞瘤大鼠模型进行正电子发射断层扫描与磁共振成像引导下的辐照。 J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了通过立体定位将致脑瘤胶质母细胞瘤细胞注射至前额叶皮层，从而建立胶质母细胞瘤大鼠模型的操作步骤。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. F98 GB 大鼠细胞模型

1. 使用来自 ATCC 的 F98 GB 细胞，以杜氏改良伊格尔培养基（Dulbecco's modified Eagle Medium）、10% 小牛血清、1% 青霉素、1% 链霉素、1% L-谷氨酰胺和 0.1% 两性霉素 B 在单层中进行培养，并置于 CO₂ 培养箱（5% CO₂，37 °C）中。
2. 将胶质瘤细胞接种至雌性 Fischer F344 大鼠（体重 170 g）脑内。
   1. 始终使用无菌器械并佩戴无菌手套。
   2. 通过腹腔注射（IP）方式，使用胰岛素注射器（1 mL，29 G）注射 74 mg/kg 氯胺酮和 11 mg/kg 赛拉嗪混合物对大鼠进行麻醉。通过肢体回缩反射消失确认麻醉成功。使用鼻部和耳部固定点将大鼠固定于立体定位仪中。在麻醉期间使用羧甲基纤维素眼用凝胶防止眼睛干燥。
   3. 从眼睛水平至颅骨后部剃毛，并使用聚维酮碘对皮肤进行消毒。
   4. 通过一条 2 cm 的正中头皮切口暴露颅骨，并在右侧额叶半球前囟后方 2 mm、外侧 2.5 mm 处用金刚石钻头钻出一个 1 mm 的孔。
   5. 插入立体定向引导的胰岛素针头（29 G），使用微量注射泵控制器（设置：注射（I50），速率 1 nL/s（001 SDN））将 5 µL 细胞悬液（含 20,000 个 F98 GB 细胞）注入深度 3 mm 处。
   6. 缓慢拔出注射器，并用骨蜡封闭钻孔。缝合皮肤并用聚维酮碘消毒。
   7. 术后使用红光灯维持动物体温。监测大鼠苏醒过程，直至其恢复足够的意识以维持胸卧位。在完全恢复前不得将其与其他动物合笼。所有动物均应饲养于环境受控条件下（12 小时明暗循环、20–24 °C、相对湿度 40–70%），自由摄食饮水（ad libitum）。需密切观察动物，监测其体重、食物和水的摄入量以及活动情况和正常行为。若观察到体重下降超过 20%，或正常行为严重恶化（e.g.，缺乏理毛行为），应使用致死剂量的戊巴比妥钠（160 mg/kg）实施安乐死。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
GB大鼠模型
F98胶质母细胞瘤细胞系	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl大鼠	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
微泵系统	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
立体定位仪	Kopf	902	Model 902 双通道小型动物立体定位仪
金刚石钻头	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
骨蜡	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
胰岛素注射器 Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil红外灯	Philips	HP3616/01
Ethilon缝线	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm