阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基 X04 标记的淀粉样蛋白斑块的可视化和标测

摘要

来源： Bisht， K.， 等 al。将光学和电子显微镜相结合，研究小胶质细胞与β-淀粉样蛋白斑块的相互作用。J. Vis. Exp. （2016）
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方案

所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。

1.部分 筛查甲氧基-X04 染色斑块的存在

1. 在立体定位小鼠脑图谱的帮助下，选择包含感兴趣区域的大脑切片，例如本例中使用的海马 CA1。将每个切片放入含有足够冷冻保护剂溶液的 24 孔培养板内的孔中，以防止切片变干。
2. 使用以下程序连续检查每个切片以避免切片变干：
   1. 用一次性移液管将磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 滴添加到显微镜载玻片中，并将切片放在液滴上。
   2. 在荧光显微镜下检查切片，以识别含有甲氧基 X04 标记的 Aβ 斑块的区域。
      注： 甲氧基-X04 可以使用荧光紫外 （UV） 滤光片（激发 340 - 380 nm）轻松观察。
3. 无需移动显微镜载物台，即可在明场和荧光模式下捕获感兴趣区域 （ROI） 的图像，因为每张图像必须在两个视野中显示相同的区域，以便将斑块的存在直接与组织切片的结构区域相关联。
4. 根据动物编号保存并命名拍摄的图像。还要记录板中的孔号和拍摄照片的字段。例如，例如：9978A1B;动物编号：9978;井号：A1;领域：明亮。成像完成后，将切片放回其指定的孔中。
   注：最后，对于每个检查的部分，都会获得两张图片，一张在明场，另一张在紫外场。
5. 在Image J中打开同一ROI的两张图像（一张在明场中，另一张在UV场中），并使用MosaicJ插件，对齐两张图像的边缘，并根据其来源的井号保存对齐和组合的图像。
6. 将图片与特定动物的编号一起保存在单独的文件夹中。组合图像以识别和定位组织切片中的斑块，并在两个不同的视野（明亮和紫外线）中全面了解整个切片。
7. 筛选过程完成后，将检查的切片储存在 -20 °C 的含有冷冻保护剂的 24 孔培养板中，直到进行免疫染色或进一步处理。

材料