所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。 1. 筛选含甲氧基-X04染色斑块的脑组织切片<ol style='margin-bottom:0;margin-top:0;padding-inline-start:48px;'><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>借助立体定位小鼠脑图谱，选择包含目标区域的脑切片，例如本示例中使用的海马CA1区。将每张切片放入含有足够冷冻保护液的24孔培养板的孔中，以防止切片干燥。</li><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>依次检查每张切片，避免其干燥，操作步骤如下：<ol style='margin-bottom:0;margin-top:0;padding-inline-start:48px;'><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='2'>使用一次性移液器将一滴磷酸盐缓冲液（PBS）加到显微镜载玻片上，并将切片置于液滴中。</li><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='2'>在荧光显微镜下观察切片，识别含有甲氧基-X04标记的Aβ斑块的区域。 注意： 使用荧光紫外（UV）滤光片（激发波长340–380 nm）可轻松观察甲氧基-X04。</li></ol></li><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>在明场和荧光模式下采集目标区域（ROI）的图像，且不移动显微镜载物台，因为每张图像必须在两种模式下显示同一区域，以便将斑块的存在直接与组织切片的结构区域相关联。</li><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>根据动物编号保存并命名所采集的图像。同时记录培养板中的孔号以及所拍摄图像的视野。例如：9978A1B；动物编号：9978；孔号：A1；视野：明场。成像完成后，将切片放回其对应的孔中。 注意： 最终，对每张被检查的切片将获得两张图像，一张为明场，另一张为紫外场。</li><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>在ImageJ中打开同一目标区域的两张图像（一张明场，一张紫外场），使用MosaicJ插件对齐两张图像的边缘，并根据其来源孔号保存对齐合并后的图像。</li><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>将图像保存在以特定动物编号命名的独立文件夹中。合并图像以识别和定位组织切片中的斑块，并在两种不同视野（明场和紫外场）下全面观察整个切片。</li><li style='background-color:transparent;color:#1a202c;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>完成筛选后，将已检查的切片保存在含有冷冻保护液的24孔培养板中，置于-20 °C冰箱中，直至进行免疫染色或其他后续处理。</li></ol>

<table style='border-collapse:collapse;font-family:Calibri;font-size:11pt;table-layout:fixed;' cellspacing='0' cellpadding='0' dir='ltr' border='1' data-sheets-root='1' data-sheets-baot='1'><tbody><tr style='height:20px;'><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Methoxy-X04</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Tocris Bioscience</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>4920</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>每片含10 mg底物</td></tr><tr style='height:21px;'><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>显微镜载玻片</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Fisher Scientific</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>12-550-15</td><td style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td></tr><tr style='height:21px;'><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>24孔组织培养板</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Fisher Scientific</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>353047</td><td style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td></tr><tr style='height:21px;'><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>乙二醇</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Fisher BioReagents</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>BP230-4</td><td style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td></tr><tr style='height:21px;'><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>甘油</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Fisher BioReagents</td><td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Roboto;font-size:7pt;font-weight:normal;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>BP229-4</td><td style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td></tr></tbody></table>

阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基-x04标记的淀粉样斑块的可视化与定位

Visualization and Mapping of Methoxy-X04-Labeled Amyloid Plaques in an Alzheimer’s Disease Mouse Brain Section

来源： <a style='text-decoration:none;' href='https://app.jove.com/v/54060/correlative-light-and-electron-microscopy-to-study-microglial-interactions-with-946-amyloid-plaques'><span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>Bisht, K., et. al<span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>．利用相关光学显微镜与电子显微镜研究小胶质细胞与 β-淀粉样蛋白斑块的相互作用．J. Vis. Exp.<span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'> (2016)</a> 本视频展示了利用荧光显微镜和明场显微镜对阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基-X04标记的淀粉样斑块进行可视化与定位，从而实现斑块与解剖结构的精确定位关联，用于研究阿尔茨海默病的病理特征。

阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基-X04标记的淀粉样斑块的可视化与定位

来源：Bisht, K., 等. 利用相关光镜与电镜技术研究小胶质细胞与β-淀粉样蛋白斑块的相互作用. J. Vis. ...

从含有感兴趣区域的鼠脑组织切片开始，将其置于缓冲液中，以在成像过程中保持组织的水合状态。该组织来自注射了甲氧基-X04（一种荧光染料）的阿尔茨海默病小鼠模型。甲氧基-X04 可特异性结合淀粉样斑块中的β-折叠片层结构，并保持其荧光特性，用于成像和分析。使用带有紫外滤光片的荧光显微镜激发甲氧基-X04，并采集其发射的荧光，以观察周围组织中荧光标记的淀粉样斑块。在不调整显微镜载物台的情况下，以明场模式拍摄同一区域的图像以显示组织结构，并以荧光模式拍摄图像以观察斑块。使用图像处理软件对明场图像和荧光图像进行配准，以将斑块精确定位到解剖结构上。这些图像在结构背景下对淀粉样斑块进行详细可视化，以研究阿尔茨海默病的病理学特征。

借助立体定位小鼠脑图谱，选取包含目标区域的脑切片，并将每张切片放入24孔细胞培养板的孔中，置于冷冻保护液内。接着，使用一次性移液器将一滴PBS滴加到显微镜载玻片上，然后将脑切片放置于液滴中。在荧光显微镜下观察切片，识别含有甲氧基-X04标记的Aβ斑块的区域。在不移动显微镜载物台的情况下，分别在明场和荧光模式下采集目标区域的图像。每张图像必须同时显示同一区域的明场和荧光图像，以将斑块与组织切片的结构区域相对应。根据动物编号保存并命名所采集的图像。同时记录图像对应的孔板中的孔号以及拍摄视野。成像完成后，将切片放回指定的孔中。按照相同程序依次检查下一个切片，以避免切片干燥。为对齐图像，请在 ImageJ 中打开同一 ROI 的明场和紫外场图像。然后使用 MosaicJ 插件对齐两张图像的边缘。将对齐并合并后的图像按照孔号保存在文件夹中，并标注特定动物的编号。合并同一只动物不同切片的图像，以识别并定位目标区域中的斑块。

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Neuroimaging

神经成像

Neurodegeneration & Disease Monitoring

神经退行性变与疾病监测

阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基 X04 标记的淀粉样蛋白斑块的可视化和标测

981 次观看. 从小鼠脑组织切片开始，该切片包含缓冲液中的感兴趣区域，以在成像期间保持水合作用。该组织是从注射甲氧基X04（一种荧光染料）的阿尔茨海默病小鼠模型中获得的。甲氧基 X04 特异性结合淀粉样斑块中的β褶片结构，并保留其荧光以进行成像和分析。使用带有紫外线滤光片的荧光显微镜，激发甲氧基-X04并捕获发射的荧光，以可视化周围组织的荧光标记的...

阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基-X04标记的淀粉样斑块的可视化与定位

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姓名	公司	目录编号	评论
Methoxy-X04	Tocris Bioscience	4920	每片含10 mg底物
显微镜载玻片	Fisher Scientific	12-550-15
24孔组织培养板	Fisher Scientific	353047
乙二醇	Fisher BioReagents	BP230-4
甘油	Fisher BioReagents	BP229-4