液滴包封细胞

方案

NIH3T3 细胞的制备：

A. 用于喷射的细胞

1. 用胰蛋白酶消化细胞，然后以1:1比例加入细胞培养基稀释，并从T75培养瓶转移至15 mL Falcon离心管中
2. 通过离心将细胞沉淀，吸除上清液，并用DPBS洗涤细胞
3. 再次离心使细胞形成沉淀，吸除上清液
4. 将细胞重悬于培养基中
5. 使用血细胞计数板测定细胞密度（约每T75培养瓶200 × 10⁴ 个细胞/mL）
6. 离心细胞悬液，吸除上清液，再根据所需的不同细胞浓度，用适量培养基重悬

B. 细胞喷射

1. 使用前涡旋混匀细胞
2. 将 200 µL 细胞溶液转移至注射器中
3. 设置脉冲发生器的适当模式
   1. 若需喷射单个液滴或多个液滴（脉冲模式），将脉冲发生器设为“E. BUR”模式
   2. 若需连续液滴喷射，将脉冲发生器设为“NORM”模式
4. 调整信号参数
   1. 设置高电平和低电平输出电压：HIL 设为 5 V，LOL 设为 0 V，并确保“LIM”LED 灯亮起
   2. 将信号设为方波脉冲
   3. 通过调整“WID”值或占空比（“DUTY”）来改变电磁阀开启时间，从而控制液滴喷射时长
   4. 通过调整“PER”值来改变喷射频率
   5. 通过调整“BUR”值来改变单次脉冲中喷射的液滴数量
5. 将细胞溶液喷射到已准备好的基底上，用于显微镜成像

C. 染色

1. 用0.5 µL钙黄绿素-AM和2 µL碘化乙啶同型二聚体溶于1 mL DPBS中配制染色液
2. 将制备好的基质浸入染色液中
3. 在成像前于37°C孵育10分钟

实验验证

1. 在尼康Eclipse TE-2000 U荧光显微镜上
   1. Spot高级软件（Diagnostics, Inc.）
   2. 活/死细胞检测

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
荧光显微镜		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
电磁阀细胞弹射装置				工作频率：1 KHz，30 psi，50 nl～0.5 μl；12 V 阀门驱动器：2.5 A 驱动电流
5加仑便携式气罐		Coleman	Powermate CT5	压缩空气：30 PSI
压力调节器		Marsh Bellofram
脉冲发生器			HP8112A	驱动频率生成：50 MHz
XYZ位移台		Newmark Systems		配备步进电机：6英寸行程XY位移台（NLS4-6-25），2.5英寸行程Z位移台（NLS4-2.5-25），三轴控制器（NSC-G3），分辨率为0.1 μm
NIH 3T3	细胞系			成纤维细胞
胰蛋白酶				0.05% 溶液
NIH 3T3细胞培养基
DPBS	缓冲液
T75				组织培养瓶
塑料锥形管				15 ml，用于组织培养