抑制大鼠神经元活动及其通过电生理学检测的方法

摘要

来源：Lai, J., et al. 在啮齿类动物大脑中同时进行电生理记录与抑制剂微注射。J. Vis. Exp. (2015)

本视频演示了一种基于微注射的技术，用于在大鼠上丘中同时进行神经元记录和抑制。该操作包括立体定位靶向、颅骨钻孔以及插入一种注射电极（injectrode），该电极在记录神经元活动的同时递送抑制性神经递质。光刺激可诱发动作电位，而药物微注射则抑制神经元兴奋性。随着神经递质水平下降，神经元活动恢复至基线水平，从而能够研究抑制及其恢复过程。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 记录-注射电极的组装

1. 使用移液器拉制仪拉制一根长约7 cm的玻璃毛细管（外径1 mm）。
2. 打断毛细管尖端，并在光学显微镜下检查其开口，确认内径在30 µm至40 µm之间。
3. 将一根长7 cm的银丝插入玻璃毛细管中，使其从玻璃移液管的非拉细端伸出约1 cm。
4. 将多余的银丝部分垂直弯折至玻璃毛细管轴线方向。
5. 在30 G皮下注射针的针杆上涂抹一滴柔性塑料粘合剂。
6. 按照图1所示示意图，将30 G皮下注射针插入玻璃移液管中。
7. 在玻璃移液管与皮下注射针的连接处再涂一层胶水，以确保密封良好。
8. 将移液管尖端朝上放置约12小时，使其胶水充分固化。最终成品如图2所示。

注意：此操作适用于急性实验，无需对移液器尖端进行灭菌。

2. 动物准备

1. 将大鼠放入麻醉盒中。
2. 使用4%异氟烷诱导麻醉，持续5至10分钟。
3. 将动物置于带有加热垫和直肠探针的立体定位仪上，以维持37 °C的体温。通过鼻罩使用2%异氟烷维持麻醉。使用耳杆和门齿固定器固定大鼠头部。
4. 涂抹眼用软膏或滴眼液，包括1%阿托品滴眼....

结果

图1：注射电极组件的示意图。 微量注射器（A）连接至记录-注射玻璃微电极，该电极由一个30 G的皮下注射针头（B）粘附在玻璃微电极（D）内的银丝（C）上构成。E

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
注射泵（UltraMicroPump III）	WPI	#UMP3
注射控制台（Micro4 Controller）	WPI	#SYS-MICRO4
Hamilton 注射器	Hamliton	(80301) 701LT 10 µL SYR	使用容量在 5 至 10 μL 之间的注射器
凝胶型氰基丙烯酸酯粘合剂	Krazy Glue	KG86648R	凝胶形式更易于涂布在 30G 注射针的针杆上
玻璃移液管	WPI	#TW100F-4	薄壁，外径 1 mm，内径 0.75 mm，带细丝的移液管
720 型玻璃微电极拉制仪	Kopf	720
银丝	A-M Systems, Inc.	782500	裸丝，直径 0.010”