将神经生长因子包封于高密度脂蛋白模拟纳米颗粒中

摘要

来源：Zhu, J., 等.，用于包裹神经生长因子的新型高密度脂蛋白模拟纳米颗粒的制备与表征。J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了利用鱼精蛋白辅助包封和脂质自组装技术逐步构建载有神经生长因子（NGF）的高密度脂蛋白模拟纳米颗粒，以用于潜在的神经营养递送应用。

方案

1. NGF HDL模拟纳米颗粒的制备

1. 将辅料磷脂酰胆碱（PC）、鞘磷脂（SM）、磷脂酰丝氨酸（PS）、油酸胆固醇酯（CO）和D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS）溶解于乙醇中，配制浓度为1 mg/mL的储备液。
   注意：储备液分装后于-20 °C保存。油酸胆固醇酯需存放在避光瓶中。PC、SM、PS和CO储备液在-20 °C下分别可稳定保存6、3、12和12个月。TPGS溶液在-20 °C下至少可稳定保存12个月。
2. 在1.5 mL微量离心管中，将10 µL NGF（1 mg/mL水溶液）与10 µL硫酸鱼精蛋白USP（1 mg/mL水溶液）混合，室温静置10分钟，形成复合物。
   注意：NGF和鱼精蛋白储备液均经分装后于-20 °C保存。NGF储备液不建议反复冻融。
3. 取59 µL PC、11 µL SM、4 µL PS、15 µL CO和45 µL TPGS加入玻璃小瓶中。混合后，在温和氮气流下蒸发乙醇约5分钟，所有辅料应在玻璃瓶底部形成一层薄而油状的薄膜。
4. 向小瓶中加入1 mL超纯水（一级水），在室温下以9,500 rpm（8,600 ×g）均质5分钟，形成原型纳米颗粒（NPs）。
5. 将步骤1.2中制备的复合物加入原型NPs中，于玻璃小瓶中使用小磁力搅拌子在37 °C下搅拌孵育30分钟。
6. 将NPs在室温下继续搅拌冷却30分钟。冷却后，加入106 µL载脂蛋白A-I（Apo A-I，1.49 mg/mL），室温搅拌过夜，形成最终的NGF高密度脂蛋白模拟纳米颗粒（NPs）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
重组人β-神经生长因子	Creative Biomart	NGF-05H
L-α-磷脂酰胆碱（PC）	Avanti	131601P	95%，鸡蛋，鸡源
鞘磷脂（SM）	Avanti	860062P	脑组织，猪源
磷脂酰丝氨酸（PS）	Avanti	840032P	脑组织，猪源
油酸胆固醇酯（CO）	Sigma	C9253
D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS）	BASF	9002-96-4	维生素E聚乙二醇琥珀酸酯
硫酸鱼精蛋白	Sigma	P3369	符合美国药典检测标准
载脂蛋白A1，人血浆来源	Athens Research & Technology	16-16-120101	1mg溶于671 µl 10 mM碳酸氢铵缓冲液，pH 7.4
匀浆器	Tekmar	T 25-S1
聚轮式匀浆器	Kinematica	PT 1200C