小鼠模型中胶质细胞重编程的立体定位病毒载体注射

本文内容

摘要

本视频演示了将腺相关病毒通过立体定位注射到转基因小鼠的大脑皮层中，以将Cre依赖的神经元重编程基因和荧光报告基因递送至胶质细胞。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 将重编程因子注射到脑内

动物准备、立体定位放置与钻孔注意事项：本方案重点介绍使用 Ascl1、Lmx1a 和 Nurr1（ALN）将 NG2（神经元-胶质抗原 2）胶质细胞重编程为中间神经元的方法。根据我们的经验，使用其他因子组合也可获得表型相似的中间神经元。
1. 将立体定位仪的 M/L-D/V 臂移动到位（位于动物上方），并固定好。
  注意事项：立体定位仪可沿前/后（A/P，Y 轴）、内侧/外侧（M/L，X 轴）和背/腹（D/V，Z 轴）方向调节注射器位置。
2. 移动注射器，使其玻璃毛细管尖端刚好位于前囟（bregma，即颅骨板交汇处）上方。
3. 确保毛细管尖端在 A/P 和 M/L 两个平面上均完全水平。若前囟位置不明确，可取外侧缝与中线缝的平均值作为参考。
4. 当毛细管尖端准确置于前囟上方时，在数字坐标计数器上将 M/L 和 A/P 坐标值均重置为 0.0。
5. 为确保动物头部处于完全水平位置，使用数字坐标计数器测量 A/P 臂位于 +2.0 和 -2.0（M/L = 0.0）时，以及 M/L 臂位于 +2.0 和 -2.0（A/P = 0.0）时的 D/V 坐标值，并相应调整门齿杆和耳杆的高度。

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材料

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