小鼠脑内脑室注射树脂毒素实现TRPV1去敏感化治疗

摘要

来源：Fukushima, A., et al. 小鼠脑室内注射树脂毒素及疼痛测试. J. Vis. Exp. (2020)

本视频演示了在小鼠中进行脑室内注射树脂毒素以使脑内TRPV1受体脱敏的操作步骤。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 脑室内注射 RTX

1. 用戊巴比妥钠（60 mg/kg，腹腔注射）麻醉小鼠，并检查翻正反射是否消失。
2. 对于脑室内（i.c.v.）给药，向右侧脑室注射5 µL树脂毒素（RTX）（20 µg/mL）。对照组以相同方式注射溶剂（10%乙醇、10%聚氧乙烯（20）单油酸山梨醇酯和80%人工脑脊液（ACSF））。
   1. 将一次性27 G针头穿过金属套管（内径0.8 mm），使针头露出3.0–3.5 mm的尖端（图1A）。
   2. 用70%酒精消毒小鼠头部，并用手指牢固夹住小鼠的鳞状骨（图1B）。注意：注意鳞状骨突起的位置，因为这些突起将作为注射的定位标志。
   3. 在头皮上横向移动针头，当针尖钩住矢状缝时即可定位该缝线。
   4. 将针尖向右移动约1 mm，再向前移动针尖并定位冠状缝（图1B）。
   5. 缓慢垂直插入针头，约10秒内注射RTX溶液，留针约10秒。
   6. 缓慢拔出针头，将小鼠放回饲养笼。通常出血极少或无出血。若发生明显出血，应考虑更换另一只小鼠。

结果

图1：脑室内（i.c.v.）注射的摄影图与示意图。 （A） 用于i.c.v.注射的针头。（B） 小鼠颅骨及针尖移动路径的示意图。鳞状骨以蓝色显示。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
树脂毒素（Resiniferatoxin）	LKT Laboratories	R1774	用于皮下/脑室内预处理及RTX测试
戊巴比妥钠（Pentobarbital sodium salt）	Tokyo Chemical Industry	P0776	用于麻醉
乙醇（99.5%）	Wako Pure Chemical Industries	057-00456	用于溶解RTX
聚氧乙烯（20）失水山梨醇单油酸酯	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	用于溶解RTX
25 mL 微量注射器	Hamilton	1702LT	用于脑室内注射
26号一次性针头	TERUMO	NN-2613S	用于脑室内注射