评估酸性后处理在脑缺血小鼠模型中的神经保护作用

摘要

来源：Zheng, Y., 等．研究酸性后处理对脑缺血神经保护作用的实验模型．J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了在小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型中应用酸性后处理（APC）以评估其对缺血性损伤的神经保护作用。视频概述了MCAO模型中再灌注的操作步骤，以及在再灌注期间应用APC以减轻兴奋性毒性、氧化应激和神经元死亡的方法。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 大脑中动脉闭塞（MCAO）：
   1. 将麻醉后的小鼠（颅骨上已安装激光多普勒血流仪（LDF）探头）仰卧位固定，并在整个手术过程中使用加热灯维持其体温。用70%乙醇对颈部进行消毒。
   2. 使用手术刀在颈部做一条旁正中皮肤切口；用镊子钝性分离软组织以暴露血管。向暴露的组织滴加一滴生理盐水以保持湿润。
   3. 使用眼科镊子将颈总动脉从周围组织和迷走神经中分离出来，注意避免损伤迷走神经。在暴露颈总动脉后，再次使用碘伏对颈部皮肤进行消毒。
   4. 在颈总动脉远端放置微血管夹，然后在近端用6-0丝线打一个死结。将血管夹尽可能放置在靠近近端的位置，以便后续操作。确保血管夹与死结之间的血管长度尽可能长，以利于后续操作。
   5. 在血管夹近端打一个松结作为临时结扎线。确保两个结之间有足够的空间用于插入单丝线栓。
   6. 使用显微眼科剪在两个结之间做一个小的纵向切口。切口应尽可能靠近死结，以便后续操作。注意不要切断血管。
   7. 通过切口插入一根12 mm尖端钝化的单丝线栓，使其进入动脉腔并推进数毫米。将松结收紧固定在线栓尖端，然后移除血管夹。
   8. 使用眼科镊子将线栓沿颈内动脉推进（推进约10 mm以阻塞大脑中动脉），直至LDF软件显示血流显著下降（>较基线血流减少80%以上）。记录闭塞开始时间。
   9. 持续闭塞大脑中动脉1小时。断开LDF探头，将小鼠置于30 °C的培养箱中完成闭塞期。
2. 再灌注与酸性后处理（APC）：
   1. 在闭塞开始后55分钟，按照上述方法使用异氟烷重新麻醉动物。将小鼠仰卧位固定，打开颈部切口并重新暴露颈总动脉。
   2. 在闭塞期结束后，使用眼科镊子轻轻拉出线栓以实现再灌注，并通过收紧结扎线将临时结扎转为永久结扎。
   3. 对于酸中毒处理，在再灌注后5、50或100分钟时，将鼻罩吸入的气体更换为含20% CO₂、20% O₂和60% N₂ 的混合气体，持续5分钟。使用间断缝合关闭切口。
   4. 将小鼠置于30 °C的加热笼中直至其恢复意识，然后将其放回清洁的单独笼具中。为小鼠提供培养皿盛装的饮水和湿润食物。术后密切监测小鼠是否出现剧烈疼痛或死亡情况。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
激光多普勒血流仪	莫尔仪器有限公司	型号 Moor VMS-LDF2
无水乙醚	国药集团化学试剂有限公司	80059618
水合三氯乙醛	国药集团化学试剂有限公司	30037517