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所有涉及动物模型的程序都经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审查。
- 大脑中动脉闭塞 （MCAO）：
将- 麻醉的小鼠（激光多普勒流量计 （LDF） 探头连接到其头骨）放置并固定在仰卧位，并在整个手术过程中使用加热灯保持体温。用70%乙醇消毒颈部。
- 用手术刀在颈部做一个正中旁皮肤切口;用镊子钝器解剖软组织以暴露血管。在暴露的组织中加入一滴生理盐水以保持水分。
- 使用眼镊子从周围组织和迷走神经中解剖颈总动脉。小心不要损伤迷走神经。颈总动脉暴露后，再次用碘伏消毒颈部皮肤。
在- 颈总动脉的远端放置一个微血管夹，然后在近端用 6-0 丝线打一个死结。将夹子放置在尽可能近端以进行后续作。确保夹具和死结之间的容器长度尽可能长，以便后续作。
通过- 打一个松散的结，在夹子的近端做一个临时缝合线。确保两个结之间有足够的空间用于单丝插入。
- 用微眼剪在两个结之间做一个小纵向切口。确保切口尽可能靠近死结，以便后续手术。小心不要切断容器。
将 - 12 毫米尖端钝化的单丝插入切口以进入动脉管腔并将其前进几毫米。拧紧单丝尖端周围的松结，然后取下夹子。
- 用眼镊子将细丝推进到颈内动脉（10 毫米以闭塞大脑中动脉），直到 LDF 软件显示血流量急剧下降（从基线血流量减少 >80%）。记录遮挡的开始时间。
闭- 塞大脑中动脉1小时。切断LDF探针并将小鼠置于30°C培养箱中进行闭塞。
- 再灌注和酸性后处理（APC）：
- 如上所述，在闭塞开始时间后55分钟用异氟醚重新麻醉动物。将小鼠置于仰卧位并固定。打开颈部切口并重新暴露颈总动脉。
- 闭塞期过后用眼镊子轻轻拉出细丝，达到再灌注，通过收紧结将临时缝合线变成永久
缝合线。- 对于酸中毒治疗，在再灌注后5,50或100分钟，将鼻锥吸入的气体改变为含有20%CO2,20%O2和60%N2的气体混合物5分钟。用中断的手术缝合线闭合切口。
将- 小鼠置于30°C的热笼中，直到小鼠恢复意识，然后将小鼠放回干净的单独笼子中。为小鼠提供装有水和湿食物的培养皿。手术后密切监测小鼠是否有过度疼痛和死亡。