向大鼠中枢神经系统鞘内递送测试化合物

摘要

来源：Chen, Y., et al．大鼠中枢神经系统中反义寡核苷酸的鞘内递送．J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了通过植入大鼠模型腰椎脊柱的导管，将测试化合物递送至脑脊液（CSF）中的过程。该化合物随脑脊液循环到达脑和脊髓，进入神经元，具有治疗潜力。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医评审委员会的审核。

1. 手术

1. 用50 mL锥形管支撑大鼠，辨认骨盆上方肌肉之间的两个天然凹陷处（图中箭头所示） 图1A）。用一只手固定住这些凹陷处，另一只手从尾侧向头侧方向轻柔按压并触摸脊柱，找到椎骨之间的第一个明显凹陷，即为第一骶椎（S1）与第六腰椎（L6）之间的椎间隙（图1B).
2. 向头侧稍作移动，以识别下一个凹陷处，即腰椎5（L5）与L6椎骨之间的椎间隙，以及注射位点（*在 图1A使用手术刀沿中线从头侧至尾侧在皮肤上做一个不超过2 cm的切口，使注射部位位于切口中心（图中虚线所示） 图1A).
3. 使用解剖剪去除结缔组织，以暴露肌层。随后，在L6腰椎棘突外侧的肌膜上做一长度为1 cm的切口。
   注意： 此时可观察到L6腰椎的骨骼。
4. 将导向套管-针组件置于第6腰椎前侧附近，沿第6腰椎前侧推入椎间孔，使针尖穿入椎管。沿针芯插入导向套管至预定位置，随后拔出23号针芯，仅保留导向套管在位。
   注意： 使用钝头镊子在插入针头前定位第6腰椎（L6）的背侧突起是有帮助的。通常，可观察到脑脊液（CSF）进入针芯（该液体可能略带血色，但这并不表示已造成损伤或针头位置不正确）。作者在....

结果

图1：注射位点与切口线的确定。 （A）用一个50 mL锥形管支撑大鼠腹部，可清晰看到骨盆上方肌肉之间的两个凹陷处（箭头所示）。（B）用一只手固定这两个凹陷处，另一只手轻轻按压并触诊脊柱，找到L5与L6椎骨之间的椎间隙，即为注射位点（图A中标注的*处）。图A中的虚线表示以注射位点为中心的切口线。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
BD intramedic PE 导管	BD	聚乙烯导管 PE50，直径 0.023 英寸	BD 427400 (10 英尺，Fischer Scientific 22-204008) 或 427401 (100 英尺，Fischer Scientific 14-170-12P)
BD intramedic PE 导管	BD	聚乙烯导管 PE10，直径 0.011 英寸	BD 427410 (10 英尺，Fischer Scientific 14-170-11B) 或 4274011 (100 英尺，Fischer Scientific 14-170-12B)
BD PrecisionGlide 一次性针头 30G	BD		BD 305128
引导套管	BD	19G x 1 WT (1.1 mm x 25 mm) 针头	BD 305186
Hamilton 100 µl 注射器	Hamilton 公司	Hamilton 100 µl 注射器
热珠灭菌器	Fine Science Tools		灭菌器型号 FST 250
聚维酮碘消毒液	PDI		S48050
生理盐水	Baxter	氯化钠 0.9% 静脉输液 BP 50 ml	FE1306G
手术刀	Feather	一次性手术刀	No. 10
小型动物加热垫	K&H Manufacturing		型号 1060
套管芯丝	McMaster-Carr	1749T14	LH-36233780
手术巾单	Dynarex		4410
手术剪刀和镊子	FST 和 Fisher Scientific
缝合线	Ethicon		4-0 或 5-0
本实验所用预制成型且已灭菌材料的替代来源
给药导管系统	SAI Infusion Systems		RIDC-01
引导套管	SAI Infusion Systems		RIDC-GCA
内导管	SAI Infusion Systems		RIDC-INC
套管芯丝	SAI Infusion Systems		RIDC-STY