评估大气压等离子体处理对葡萄糖剥夺神经母细胞瘤细胞的影响

摘要

来源：Yan, X., 等., 大气压等离子体射流作为抗葡萄糖剥夺诱导的SH-SY5Y细胞损伤神经保护剂的新应用。J. Vis. Exp. (2017)

该视频展示了低剂量常压等离子体处理通过调节氧化应激并提高细胞活力，在葡萄糖缺乏的神经母细胞瘤细胞中发挥神经保护作用。

方案

1. SH-SY5Y细胞的大气压等离子体射流（APPJ）处理

1. 调节石英管喷嘴与放置96孔板平台之间的距离至3 cm。确保等离子体束能够接触到培养基表面。
   注意：距离测量并非从孔板底部开始，而是首先将石英管喷嘴与用于放置96孔板的平台之间的距离调整为3 cm。
2. 在进行大气压等离子体射流（APPJ）处理前，除对照孔外，将每孔中的培养基更换为不含葡萄糖的RPMI 1640培养基。
3. 将孔板置于APPJ喷嘴下方，并确保射流可垂直进入各孔中。
4. 分别对不同孔中的细胞进行0 s、1 s、2 s、4 s、8 s和12 s的APPJ处理。
   注意：APPJ通过电离氦气产生（图1）。为排除氦气本身对细胞的影响，对因葡萄糖剥夺而受损的细胞同时采用4 s和8 s的氦气流处理。所有处理均应设置三个重复。

2. 细胞活力检测

注意：此步骤中请勿更换培养基。

1. APPJ 处理后，将细胞在细胞培养箱中孵育 1 小时。
2. 向每孔加入 10 µL 细胞计数试剂盒-8（CCK-8）溶液。
3. 在 37 °C 下孵育细胞 4 小时。
   注意：SH-SY5Y 细胞系对葡萄糖剥夺条件敏感。葡萄糖剥夺 1 小时....

结果

图1：大气压等离子体射流（APPJ）发射物中典型的活性氮物种（RNS）和活性氧物种（ROS）反应。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
SH-SY5Y 细胞系	中国典型培养物保藏中心	3111C0001CCC000026
RPMI 1640 培养基	Thermo Scientific	21875091	4 °C 保存
无葡萄糖 RPMI 1640 培养基	Thermo Scientific	11879020	4 °C 保存
胎牛血清	Thermo Scientific	16000044	-20 °C 保存
96 孔板	corning	3599
细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)	Dojindo Laboratories	CK04	4 °C 保存
酶标仪	Tecan	M200 Pro	用于测定 450 nm 处的吸光度
高压功率放大器	Trek	PD06087	用于放大功率
函数信号发生器	MaZe Electronics Science&Technology	AT30120	用于提供特定信号
高压探头	Tektronix	P6015A	用于检测高电压
数字示波器	Tektronix	DPO4104B	用于显示信号