将中间神经元前体细胞移植到小鼠幼崽脑内

摘要

来源：Quattrocolo, G., et al. 将中间神经元前体细胞同源移植至出生后早期小鼠大脑。J. Vis. Exp. (2018)

本视频演示了使用同位或异位方法将中间神经元前体细胞移植到新生小鼠大脑中的操作。该过程包括固定麻醉后的受体幼鼠，确定目标脑区，并注射来自同发育阶段供体幼鼠的前体细胞悬液。注射后，将幼鼠转移至加热垫上恢复，以便后续评估供体细胞的存活与成熟情况。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会以及 JoVE 兽医评审委员会的审核。

1. P0-P2 小鼠脑组织的取出

1. 在开始操作前，将数个培养皿中装入冰冷的、充氧的蔗糖人工脑脊液（sACSF）。同时，在收集管中加入约 25 mL sACSF。
2. 用保鲜膜或手套包裹出生后第 0 至 2 天（P0-P2）的幼鼠，并将其完全覆盖后置于冰上。设置计时器为 5 分钟并开始计时。计时结束后取出幼鼠，检查其对后肢足垫夹捏无反应。
3. 将幼鼠断头，把头部放入盛有 sACSF 的培养皿中。沿中线切开皮肤以暴露颅骨。
4. 找到位于后脑/脊髓交界处颅骨上的开口，将镊子一端沿颅骨背侧插入。轻轻夹住颅骨中线部位，向两侧“剥离”颅骨碎片以暴露脑组织，注意避免损伤脑组织。
5. 去除颅骨的背侧和侧部后，使用镊子或刮匙从脑腹面下方轻轻托起，将脑组织完整取出，尽量避免任何区域受损。将脑组织放入另一个盛有充氧 sACSF 的培养皿中。注意：本文提供了两种不同的方法用于分离海马、纹状体和皮层。第一种方法（步骤 2.1–2.10）适用于任何小鼠品系；而第二种方法（步骤 3.1–3.7）需要使用荧光报告小鼠，以便清晰区分纹状体与苍白球及其他脑区结构。若无需获取纹状体，则可忽略两种方法中针对纹状体的操作部分。

2. 分离纹状体、海马和皮层，技术 #1

1. 将整个脑组织置于切片模具....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
脑部定位矩阵	Roboz	SA-2165	仅在分离纹状体时需要
精细尖头杜蒙镊	Roboz	RS-4978
显微解剖剪刀	Roboz	RS-5940
刀片	ThermoFisher	12-640
巴斯德吸管	ThermoFisher	1367820C
Nanoject III 注射仪	Drummond	3-000-207
带支架的手动操作器	World Precision Instruments	M3301R/M10
5 ml 圆底塑料离心管	ThermoFisher	149591A
60 mm 培养皿	ThermoFisher	12556001
100 mm 培养皿	ThermoFisher	12565100
蛋白酶 K（Pronase）	Sigma	10165921001
胎牛血清（FBS）	ThermoFisher	16140063
脱氧核糖核酸酶 I（DNase I）	Sigma	4716728001
Celltrics 50µm 滤膜	Sysmex	04-0042327
台盼蓝	ThermoFisher	15-250-061
血细胞计数板	ThermoFisher	02-671-6