电穿孔介导的小鼠背根神经节转染促进感觉轴突再生

所有涉及动物模型的程序都经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审查。

背
1. 根神经节 （DRG） 注射
   腹
   1. 腔注射麻醉液（终浓度为 20 mg/mL 的无菌盐水中稀释的 avertin，其中 avertin 200 mg/kg 体重）以维持麻醉，然后注射 DRG。
   将
   2. 脱氧核糖核酸 （DNA） 质粒或核糖核酸 （RNA） 寡核苷酸（每个 DRG 1 μL）加载到玻璃毛细管移液器中。
   3. 小心地将毛细管玻璃移液器的尖端插入 DRG。
   4. 使用细胞内显微注射分配系统（30 psi，8 ms）逐渐将 1.0 μL DNA 质粒或 RNA 寡核苷酸溶液注入 DRG 中。
      注意：注射持续时间应持续不少于 5 分钟。
2. 电穿孔
   将
   1. 磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 滴在电极尖端。
   2. 用消毒过的方形棉纱布清理出血。
   用
   3. 电极轻轻捏住目标DRG，并用电穿孔系统施加5个方形电脉冲。
   4. 分别用 5-0 尼龙缝合线闭合肌肉层和皮肤层。
   将
   5. 小鼠放在加热的毯子（35.0°C）上，密切注意，直到它完全恢复足够的意识以维持胸骨卧位。在小鼠从麻醉中完全恢复后，将小鼠放回家庭笼中。
      注意：小鼠大约需要60分钟才能从37°C毯子上的麻醉中完全恢复。将一粒（200 毫克）布洛芬溶解在 1,000 毫升水（0.2 毫克/毫升）中，用于日常喂养，以缓解术后疼痛。
坐
3. 骨神经压碎
   1. DRG电穿孔后两到三天（取决于实验设计），用麻醉液（avertin 400 mg/kg体重）腹膜内麻醉小鼠。
   将
   2. 鼠标的四个肢体粘在软木板上。
   3. 沿中线向左侧做一个 0.5 厘米的切口，长 1 厘米。纵向切割肌肉，例如臀大肌和梨状肌。暴露坐骨大孔和坐骨切迹之间的坐骨神经段。
   4. 用显微外科镊子压碎神经12秒，并用10-0尼龙神经外缝线标记挤压部位。在硬脑膜上打一个结以标记挤压部位。
   5. 用 5-0 尼龙缝合线闭合肌肉和皮肤层。
   将
   6. 小鼠放在加热的毯子（35.0°C）上，密切注意，直到它完全恢复足够的意识以维持胸骨卧位。小鼠从麻醉中完全恢复后，将小鼠放回家庭笼子中。
      注意：小鼠大约需要60分钟才能从37°C毯子上的麻醉中完全恢复。将一粒（200 毫克）布洛芬溶解在 1,000 毫升水（0.2 毫克/毫升）中，用于日常喂养，以缓解术后疼痛。