在小鼠模型中通过鞘内递送病毒治疗中枢神经系统疾病

摘要

来源：Li, D., et al. 成年小鼠中重组腺相关病毒的直接鞘内注射. J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了在清醒小鼠的脑脊液（CSF）中进行腺相关病毒（AAV）鞘内注射的操作步骤，包括注射器的准备、脊柱的定位以及针头的精确插入。该方法可验证基因靶向递送的效果，为其在中枢神经系统（CNS）治疗中的应用潜力提供支持。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 20% 盐酸利多卡因储备液的配制

1. 称取2 g盐酸利多卡因，加入5–6 mL无菌水，轻轻涡旋混匀，再用无菌水定容至10 mL。
2. 将储备液经0.2微米滤器过滤，按每管1 mL分装至1.5 mL离心管中，用封口膜密封，4 °C保存。

2. 在清醒小鼠中进行直接鞘内AAV递送

1. 使用含70%乙醇的无菌纱布擦拭工作区域，并准备好所需物品。
2. 通过将95 µL的rAAVrh10储存液（5 x 10¹² 基因组拷贝/mL）加入无菌的200 µL微量离心管中，再加入5 µL的20%盐酸利多卡因储存液，配制100 µL的AAVrh.10/1%盐酸利多卡因复合物。用移液器反复吹打混匀。随后将病毒溶液置于冰上（4 °C）保存。
   注意：每只小鼠使用8 µL。
3. 准备用于注射的含AAV溶液的注射器
   1. 装配一支带有27 G针头的25 µL Hamilton注射器，并将针头斜面与注射器上的体积刻度对齐。
   2. 轻柔地吸取8 µL病毒溶液（含4 x 10¹⁰ 基因组拷贝）至注射器中，确保去除气泡。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
FVB/NJ 小鼠	查尔斯河实验室中国公司
盐酸利多卡因一水合物	HEOWNS	73-78-9
AAV	马萨诸塞大学医学院基因治疗中心病毒载体核心实验室
25µL 汉密尔顿注射器/27-30g 针头	GASTIGHT	1702
70% 乙醇	WEN ZHI
纱布	Wei AN	5171112	8cm*10cm*12cm